β-丙氨酸不僅是一種醫(yī)藥中間體,還可以作為食品添加劑,改善食物味道,提高產(chǎn)品質(zhì)量??蛇\(yùn)用構(gòu)建L-天冬氨酸α-脫羧酶大腸桿菌的方式生產(chǎn)該氨基酸,制備工程菌的示意圖如圖所示,回答下列問題:
(1)構(gòu)建工程菌主要需要四個(gè)步驟:
目的基因的獲取
目的基因的獲取
→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→
將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
→目的基因的檢測與鑒定。
(2)構(gòu)建成功的C除含有目的基因外,還應(yīng)含有
啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因
啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因
(答出三點(diǎn)即可)。該過程分別對(duì)質(zhì)粒和含目的基因的片段進(jìn)行雙酶切,雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是
防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接
防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接
。
(3)為了確定工程菌中的L-天冬氨酸α-脫羧酶基因是否轉(zhuǎn)錄,可用同位素或熒光標(biāo)記的
L—天冬氨酸α—脫羧酶基因單鏈
L—天冬氨酸α—脫羧酶基因單鏈
作探針進(jìn)行分子雜交檢測。
(4)若要通過基因工程的方法探究L-天冬氨酸α-脫羧酶基因能否在酵母菌中表達(dá),實(shí)驗(yàn)思路是
將L—天冬氨酸α—脫羧酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌,檢測酵母菌中β—丙氨酸的含量
將L—天冬氨酸α—脫羧酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌,檢測酵母菌中β—丙氨酸的含量
。