HSV-1是單純皰疹病毒的一種類型,HSV-1病毒顆粒的組裝主要由包裝信號(hào)序列(a′)介導(dǎo)??蒲腥藛T從HSV-1基因組中分離出a′,利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了質(zhì)粒pHSL并進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn),流程如圖1。請(qǐng)回答下列問題。
注:LacZ的表達(dá)產(chǎn)物β-半乳糖苷酶能將無色化合物X-gal水解產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)而使細(xì)胞變藍(lán)
(1)過程①先用
限制
限制
酶將HSV-1的DNA酶解成若干片段,再利用
(核酸)探針
(核酸)探針
與含有a′的酶解片段進(jìn)行雜交,根據(jù)陽性信號(hào)逐步篩選出盡可能短的a′所在片段。
(2)過程②中使用的限制酶是
XbaⅠ和SacⅠ
XbaⅠ和SacⅠ
。過程③采用的方法是
Ca2+處理
Ca2+處理
。過程④在轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)Vero細(xì)胞時(shí),常在培養(yǎng)液中添加動(dòng)物血清,其目的是
補(bǔ)充細(xì)胞所需的未知成分
補(bǔ)充細(xì)胞所需的未知成分
。
(3)tsK株是具有感染性的HSV-1溫度敏感株。在tsK株的輔助下,pHSL能組裝成假病毒(不含完整病毒基因組的顆粒),從而獲得tsK株和含假病毒的混合毒株。圖2是Vero細(xì)胞連續(xù)傳代過程中,混合毒株的滴度(代表單位體積液體中病毒顆粒的多少)變化曲線及每代中假病毒的占比(柱形圖)。
①研究中,選用
P6
P6
代混合毒株用于后續(xù)神經(jīng)細(xì)胞的接種實(shí)驗(yàn)可減少tsK株可能造成的細(xì)胞毒性,理由是
P6代混合病毒中tsK株滴度最低,假病毒顆粒的比例最高
P6代混合病毒中tsK株滴度最低,假病毒顆粒的比例最高
。
②為驗(yàn)證假病毒能否感染體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞并表達(dá)LacZ基因,科研人員將混合毒株與大鼠神經(jīng)細(xì)胞按一定比例在
37
37
℃下混合培養(yǎng)48h,用含
X-gal
X-gal
(物質(zhì))的檢測(cè)液檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大約20%的細(xì)胞變藍(lán),說明
假病毒能感染神經(jīng)細(xì)胞,將外源基因LacZ導(dǎo)入并表達(dá)
假病毒能感染神經(jīng)細(xì)胞,將外源基因LacZ導(dǎo)入并表達(dá)
。