如圖所示為A、B、C三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因D的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍(lán)色顯色基因,其表達(dá)產(chǎn)物可以將無(wú)色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì),使大腸桿菌的菌落呈藍(lán)色,否則菌落為白色。EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶,質(zhì)粒上限制酶括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答:
(1)利用PCR技術(shù)對(duì)一個(gè)目的基因擴(kuò)增n次,需要
2n-1
2n-1
對(duì)引物,熱穩(wěn)定DNA聚合酶能從引物的
3’
3’
端開(kāi)始連接脫氧核苷酸,從而獲得大量目的基因D。
(2)據(jù)圖分析,質(zhì)粒A、C不能作為目的基因D的載體,理由分別是
(質(zhì)粒A)缺少標(biāo)記基因、(質(zhì)粒C)復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割
(質(zhì)粒A)缺少標(biāo)記基因、(質(zhì)粒C)復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割
。將目的基因D與質(zhì)粒B進(jìn)行重組,應(yīng)該選用的酶有
PvuⅠ和DNA連接酶
PvuⅠ和DNA連接酶
。
(3)在基因工程的操作過(guò)程中,需要檢查目的基因D是否重組到質(zhì)粒中,使用EcoRI處理重組質(zhì)粒,完全酶切后,進(jìn)行電泳檢測(cè)。若電泳圖譜中出現(xiàn)長(zhǎng)度為1.6kb和3.1kb,或者
0.6
0.6
kb和
4.1
4.1
kb的片段,則可判斷質(zhì)粒B已與目的基因D重組成功。
(4)利用自身不含lacZ基因且對(duì)抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化成功的細(xì)胞中,篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞的方法是:在含有
氨芐青霉素和X-gal
氨芐青霉素和X-gal
的培養(yǎng)基上培養(yǎng),形成
白
白
色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。
(5)下列關(guān)于基因工程常用運(yùn)載體——質(zhì)粒的說(shuō)法正確的是
ACD
ACD
。
A.使用質(zhì)粒作為運(yùn)載體可避免目的基因被分解
B.質(zhì)粒只有與目的基因重組后才能進(jìn)入細(xì)胞
C.質(zhì)粒上具有1個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn),以便于切割后與目的基因連接
D.質(zhì)粒的復(fù)制和表達(dá)也遵循中心法則