25．如圖所示為A、B、C三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因D的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因，其表達(dá)產(chǎn)物可以將無(wú)色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì)，使大腸桿菌的菌落呈藍(lán)色，否則菌落為白色。EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶，質(zhì)粒上限制酶括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答：
（1）利用PCR技術(shù)對(duì)一個(gè)目的基因擴(kuò)增n次，需要
對(duì)引物，熱穩(wěn)定DNA聚合酶能從引物的
端開始連接脫氧核苷酸，從而獲得大量目的基因D。
（2）據(jù)圖分析，質(zhì)粒A、C不能作為目的基因D的載體，理由分別是
。將目的基因D與質(zhì)粒B進(jìn)行重組，應(yīng)該選用的酶有
。
（3）在基因工程的操作過程中，需要檢查目的基因D是否重組到質(zhì)粒中，使用EcoRI處理重組質(zhì)粒，完全酶切后，進(jìn)行電泳檢測(cè)。若電泳圖譜中出現(xiàn)長(zhǎng)度為1.6kb和3.1kb,或者
kb和
kb的片段，則可判斷質(zhì)粒B已與目的基因D重組成功。
（4）利用自身不含lacZ基因且對(duì)抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化成功的細(xì)胞中，篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞的方法是：在含有
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成
色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。
（5）下列關(guān)于基因工程常用運(yùn)載體——質(zhì)粒的說(shuō)法正確的是
。
A．使用質(zhì)粒作為運(yùn)載體可避免目的基因被分解
B．質(zhì)粒只有與目的基因重組后才能進(jìn)入細(xì)胞
C．質(zhì)粒上具有1個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便于切割后與目的基因連接
D．質(zhì)粒的復(fù)制和表達(dá)也遵循中心法則
