磷是植物生長和發(fā)育所必需的大量元素之一,在土壤缺磷條件下,OsPHR2基因可顯著提高植物對磷的吸收。為獲得能高效利用磷的轉(zhuǎn)基因小麥植株,科學(xué)家以普通小麥為受體,采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對OsPHR2基因和草銨膦抗性基因進行了遺傳轉(zhuǎn)化,如圖表示表達(dá)載體片段和酶切位點。
回答下列問題:
(1)制備轉(zhuǎn)化片段:首先利用
A
A
(A.HindⅢ酶 B.BamHⅠ酶和KpnⅠ酶 C.BamHⅠ酶和HindⅢ酶 D.SacⅠ酶和KpnⅠ酶)切環(huán)狀表達(dá)載體,獲得如圖線性轉(zhuǎn)化片段,該片段中除含有OsPHR2基因和草銨膦抗性基因外,還應(yīng)含有
啟動子和終止子
啟動子和終止子
。
(2)轉(zhuǎn)基因小麥:將小麥種子在無菌條件下進行
消毒
消毒
,剝?nèi)∮着呓臃N于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,經(jīng)過脫分化后形成
愈傷組織
愈傷組織
。通過基因槍法將轉(zhuǎn)化片段導(dǎo)入受體材料中,從受體材料角度考慮,影響轉(zhuǎn)化成功率的因素有
小麥的品種、基因型和生理狀態(tài)等
小麥的品種、基因型和生理狀態(tài)等
(寫1點即可)。
(3)培養(yǎng)與移栽:將轉(zhuǎn)基因小麥?zhǔn)荏w組織暗培養(yǎng)后,轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上,利用
草銨膦
草銨膦
進行篩選,將獲得的叢狀苗轉(zhuǎn)移至
生根
生根
培養(yǎng)基上,獲得試管苗后經(jīng)
煉苗(或鍛煉)
煉苗(或鍛煉)
才可移栽。
(4)轉(zhuǎn)OsPHR2基因植株的檢測:提取轉(zhuǎn)基因小麥植株葉片基因組DNA,分別對目的基因OsPHR2進行
PCR
PCR
,其擴增產(chǎn)物通過
電泳(或瓊脂糖凝膠電泳)
電泳(或瓊脂糖凝膠電泳)
進行分離,結(jié)果如圖2。
陽性對照組和空白對照組檢測反應(yīng)體系配方的區(qū)別是,前者需加入
OsPHR2基因
OsPHR2基因
。實驗結(jié)果表明
4、5、7
4、5、7
組植株目的基因已經(jīng)整合到小麥基因組中。
(5)利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲取磷高效吸收利用的小麥新品種,它的環(huán)保價值有
減少土壤富營養(yǎng)化
減少土壤富營養(yǎng)化
(寫1點即可)。