潘老師帶領(lǐng)同學在暑假以“血紅蛋白的提取和分離”為課題,進行了科學實踐活動。分析并回答下列問題:
(1)提取血紅蛋白的實驗材料,選
豬血
豬血
(填“豬血”或“雞血”),因為 哺乳動物成熟紅細胞中沒有細胞核和各種細胞器
哺乳動物成熟紅細胞中沒有細胞核和各種細胞器
。
(2)為了防止血液凝固,在采血容器中要預先加入 抗凝劑
抗凝劑
。
(3)樣品處理中紅細胞要 生理鹽水
生理鹽水
洗滌,并采用低速短時間離心,如此反復三次,直至 上清液不再呈現(xiàn)黃色
上清液不再呈現(xiàn)黃色
,表明紅細胞已經(jīng)洗滌干凈。
(4)將洗滌干凈的紅細胞置于燒杯中,加入 蒸餾水
蒸餾水
和 甲苯
甲苯
使紅細胞破裂,釋放出血紅蛋白。
(5)通過粗分離獲得血紅蛋白混合液后,可以用凝膠色譜法進一步純化,此方法能分離蛋白質(zhì),根據(jù)的是 相對分子質(zhì)量的大小
相對分子質(zhì)量的大小
。
(6)操作時要注意色譜柱的裝填不得有氣泡。氣泡會 攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序
攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序
降低分離效果。
(7)某研究人員采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳對4種不同方法提取出的某蛋白進行分離的結(jié)果如圖所示。
①SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)的原理是 SDS所帶負電荷大大超過了蛋白質(zhì)原有的電荷量
SDS所帶負電荷大大超過了蛋白質(zhì)原有的電荷量
,因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間電荷差別,使電泳的遷移率完全取決于 分子的大小
分子的大小
。
②圖中Marker(標樣)所起的作用是 對照
對照
,不同的條帶和條帶的深淺分別代表 不同的蛋白質(zhì)和含量的多少
不同的蛋白質(zhì)和含量的多少
。
③據(jù)圖分析,你認為最佳提取方法是 2
2
號,因為 據(jù)圖可知,對應(yīng)的條帶最多且顏色最深,說明該提取方法獲得的蛋白質(zhì)種類和含量最多
據(jù)圖可知,對應(yīng)的條帶最多且顏色最深,說明該提取方法獲得的蛋白質(zhì)種類和含量最多
。