鐮刀型細(xì)胞貧血癥是一種單基因遺傳病,患者的血紅蛋白β-肽鏈第6位氨基酸谷氨酸被纈氨酸代替,導(dǎo)致功能異常。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)異常血紅蛋白的氨基酸序列改變的根本原因是編碼血紅蛋白基因的
堿基對(duì)(脫氧核苷酸)
堿基對(duì)(脫氧核苷酸)
序列發(fā)生改變。
(2)將正常的血紅蛋白基因?qū)牖颊叩墓撬柙煅杉?xì)胞中,可以合成正常的血紅蛋白達(dá)到治療的目的,此操作
不屬于
不屬于
(填“屬于”或“不屬于”)蛋白質(zhì)工程。
(3)用基因工程方法制備血紅蛋白時(shí),可先提取早期紅細(xì)胞中的
mRNA
mRNA
,以其作為模板,在
逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)
逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)
酶的作用下反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;cDNA與載體需在限制酶和
DNA連接
DNA連接
酶的作用下,拼接構(gòu)建基因表達(dá)載體,用
Ca2+處理法(感受態(tài)法)
Ca2+處理法(感受態(tài)法)
(方法)導(dǎo)入受體菌后進(jìn)行表達(dá)。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,常采用
PCR擴(kuò)增
PCR擴(kuò)增
技術(shù)。
(4)檢查受體菌是否已合成血紅蛋白,可從受體菌中提取
蛋白質(zhì)
蛋白質(zhì)
,用相應(yīng)的抗體進(jìn)行
抗原-抗體
抗原-抗體
雜交,若出現(xiàn)
雜交帶
雜交帶
,則表明該受體菌已合成血紅蛋白。