馬鈴薯蛋白酶抑制劑Ⅱ除作為植物儲藏蛋白外，還可以作為植物抵抗昆蟲侵害的重要手段?？蒲腥藛T克隆了馬鈴薯蛋白酶抑制劑Ⅱ基因的cDNA（PINⅠ），構(gòu)建了基因表達(dá)載體（如圖），并將其轉(zhuǎn)化到水稻中，使水稻自身產(chǎn)生抗蟲蛋白而達(dá)到抗蟲目的。請回答問題。

（1）馬鈴薯蛋白酶抑制劑Ⅱ在

核糖體

核糖體

（填細(xì)胞結(jié)構(gòu)）中合成后運(yùn)輸?shù)揭号葜袃Υ妫悦獗患?xì)胞中的

蛋白酶

蛋白酶

降解；昆蟲取食植物，馬鈴薯蛋白酶抑制劑Ⅱ與昆蟲消化道內(nèi)的蛋白酶形成酶—抑制劑復(fù)合物，最終導(dǎo)致昆蟲因缺乏代謝中必需的

氨基酸

氨基酸

而死亡。
（2）過程①表示

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

。
（3）為了便于擴(kuò)增的PINⅡ基因與載體1連接，需要在引物F和引物R的

5'

5'

端分別添加AAGCTT序列和

TCTAGA

TCTAGA

序列；PINⅡ擴(kuò)增完成最后一次循環(huán)后，仍需在72℃下繼續(xù)延伸5min,其主要目的是

使子鏈充分延伸

使子鏈充分延伸

。
（4）下列物質(zhì)中，屬于過程③正常進(jìn)行所必需的有

a、b、e

a、b、e

（填字母）。
a.限制酶XhoⅠb.限制酶HindⅢc.限制酶XbaⅠd.緩沖液 e.T4DNA連接酶 f.Taq DNA聚合酶
（5）過程⑦篩選時，首先將愈傷組織取出，用無菌水清洗兩遍，以除去附著于愈傷組織表面的

農(nóng)桿菌

農(nóng)桿菌

菌液，然后轉(zhuǎn)移到含

潮霉素

潮霉素

的選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行暗培養(yǎng)，挑選抗性愈傷組織誘導(dǎo)再分化。
（6）馬鈴薯蛋白酶抑制劑Ⅱ具有誘導(dǎo)表達(dá)的特性。轉(zhuǎn)化的PINⅡ基因僅在植物受到傷害（如蟲害）后表達(dá)，其生物學(xué)意義在于既能減少

能量和物質(zhì)

能量和物質(zhì)

的浪費(fèi)，又能延緩害蟲對馬鈴薯蛋白酶抑制劑Ⅱ產(chǎn)生

抗性

抗性

。