普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），其能在纖維細(xì)胞中特異性表達(dá)，產(chǎn)生的 β-甘露糖苷酶催化半纖維素降解，使棉纖維長度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入棉花細(xì)胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過程如圖所示。請分析回答：

（1）①和②過程中所用的限制性核酸內(nèi)切酶分別為

Hindlll和BamHI

Hindlll和BamHI

、

Smal

Smal

。
（2）過程①中纖維細(xì)胞E6啟動(dòng)子在質(zhì)粒1上只以一種方向的相連，請解釋GhMnaA2基因在質(zhì)粒2上可以正向和反向兩種方向相連的原因是

過程②中目的基因和質(zhì)粒形成相同的粘性末端

過程②中目的基因和質(zhì)粒形成相同的粘性末端

，這種操作的缺點(diǎn)是目的基因容易發(fā)生

自身環(huán)化

自身環(huán)化

，從而影響與質(zhì)粒的拼接。
（3）基因表達(dá)載體除了圖示組成外，至少還有

復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因

復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因

。
（4）過程③中需用CaCl₂處理農(nóng)桿菌，目的是

增加農(nóng)桿菌細(xì)胞壁的通透性

增加農(nóng)桿菌細(xì)胞壁的通透性

，從而使外源基因容易導(dǎo)入。
（5）過程④利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞的過程，整合到棉花細(xì)胞染色體DNA上去的區(qū)段是重組質(zhì)粒中的

T-DNA

T-DNA

部分，在植物組織培養(yǎng)前需要把與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)后的外植體轉(zhuǎn)移到含有

抗生素

抗生素

的培養(yǎng)基上進(jìn)行脫菌培養(yǎng)。
（6）導(dǎo)入棉花細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA能

與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對

與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對

從而阻止

β-甘露糖苷酶

β-甘露糖苷酶

合成，使棉纖維更長。