B基因存在于水稻基因組中,其僅在體細(xì)胞(2n)和精子中正常表達(dá),在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達(dá)對(duì)卵細(xì)胞的影響,設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)。
(1)可從水稻體細(xì)胞或
精子
精子
中分離B基因轉(zhuǎn)錄的mRNA。B基因在水稻卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄,從基因結(jié)構(gòu)角度推測(cè)其可能的原因是卵細(xì)胞中 B基因的啟動(dòng)子無(wú)法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄
B基因的啟動(dòng)子無(wú)法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄
。
(2)Luc基因是熒光素酶基因,能催化熒光素產(chǎn)生熒光。B-Luc融合基因形成過(guò)程中需要的酶是 限制酶和DNA連接酶
限制酶和DNA連接酶
。
(3)在過(guò)程①②轉(zhuǎn)化篩選時(shí),過(guò)程 ②
②
中T-DNA整合到受體細(xì)胞染色體DNA上,過(guò)程 ①
①
中 在培養(yǎng)基中應(yīng)加入卡那霉素。
(4)最終獲得轉(zhuǎn)基因植物的卵細(xì)胞出現(xiàn) 熒光
熒光
,則證明B基因在水稻卵細(xì)胞中成功表達(dá)。
(5)從轉(zhuǎn)基因水稻植株未成熟種子中分離出胚,觀察到細(xì)胞內(nèi)僅含一個(gè)染色體組,判定該胚是由未受精的卵細(xì)胞發(fā)育形成的,而一般情況下水稻卵細(xì)胞在未受精時(shí)不進(jìn)行發(fā)育,由此表明 B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚
B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚
。