HIN1甲流病毒(RNA病毒)主要通過飛沫傳播,也可以通過接觸污染物體或空氣傳播,能夠迅速適應(yīng)環(huán)境和宿主的變化,進(jìn)而形成新的病毒株。及時(shí)診斷并對病毒進(jìn)行測序,有利于有效防控疾病的流行。
(1)原則上感染過H1N1甲流病毒的人仍會(huì)感染,但癥狀會(huì)比首次感染更輕的原因是
體內(nèi)存在的記憶細(xì)胞和抗體仍能識別清除部分甲流病毒
體內(nèi)存在的記憶細(xì)胞和抗體仍能識別清除部分甲流病毒
。
(2)核酸檢測時(shí),采集的咽拭子需要放入含有紅色保存液的采樣管中保存以防止核酸被分解。核酸保存液中的緩沖物質(zhì)能維持
pH值
pH值
相對穩(wěn)定;保存液中所含的胍鹽是一種常用的蛋白質(zhì)變性劑,它可以
破壞病毒蛋白外殼(的空間結(jié)構(gòu))
破壞病毒蛋白外殼(的空間結(jié)構(gòu))
,從而暴露待測的核酸,并抑制環(huán)境中無處不在的
RNA(水解)
RNA(水解)
酶活性;保存液中還含有一種酸堿指示劑酚紅,其作用是監(jiān)控保存液酸堿度是否改變導(dǎo)致樣品
失效
失效
。
(3)判斷患者體內(nèi)甲流毒株是否出現(xiàn)了變異,需先將病毒核酸逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,并對其進(jìn)行測序。雙脫氧法是測序的方法之一,該方法需要使用脫氧核苷三磷酸(dNTP)和雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP,如圖1)。
①dNTP和ddNTP中Y處的基團(tuán)分別是
H、H
H、H
,參與DNA合成時(shí),圖示
α和β
α和β
之間的磷酸鍵會(huì)斷裂。ddNTP會(huì)使子鏈停止延伸的原因是
ddNTP的3’位不含羥基,不能與下一個(gè)脫氧核苷酸形成磷酸二酯鍵
ddNTP的3’位不含羥基,不能與下一個(gè)脫氧核苷酸形成磷酸二酯鍵
。
②用圖2中的引物分別在4支試管中對該cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,在每支試管中加入4種dNTP和1種ddNTP,因ddNTP與dNTP競爭核苷酸鏈延長位點(diǎn),DNA鏈將會(huì)分別在A、C、G及T位置終止延伸,從而形成
不同長度的DNA(單鏈)片段
不同長度的DNA(單鏈)片段
。對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳,結(jié)果如圖2(圖中箭頭代表電泳方向),則該cDNA的未知序列應(yīng)為5′
—CTAAGCTCGACT—
—CTAAGCTCGACT—
3′。