家禽的飼料中富含谷物，纖維素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纖維素的酶，阻礙了家禽對(duì)飼料的吸收與利用。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌，將其添加到飼料中，以提高家禽養(yǎng)殖效率?？莶菅挎邨U菌能分泌一種可降解纖維素的酶，這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達(dá)W基因，需使用圖1中質(zhì)粒作為載體，圖2為含W基因的DNA片段。回答下列問(wèn)題：

（1）在將重組質(zhì)粒導(dǎo)入乳酸桿菌之前，需要用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理乳酸桿菌，使之處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。乳酸桿菌作為基因工程的受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)有

繁殖快、是單細(xì)胞結(jié)構(gòu)、自身遺傳物質(zhì)相對(duì)較少

繁殖快、是單細(xì)胞結(jié)構(gòu)、自身遺傳物質(zhì)相對(duì)較少

（答出3點(diǎn)）。
（2）用PCR技術(shù)擴(kuò)增W基因利用了

DNA雙鏈復(fù)制

DNA雙鏈復(fù)制

的原理，用到的引物的作用是

與DNA單鏈結(jié)合，使DNA聚合酶從引物的一端延伸子鏈

與DNA單鏈結(jié)合，使DNA聚合酶從引物的一端延伸子鏈

，用到的DNA聚合酶與普通的酶相比，具有的特點(diǎn)是

耐高溫

耐高溫

。
（3）W基因以乙鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸的方向?yàn)?'→3'。下表是幾種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，圖1、圖2標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。為獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)分別使用哪些限制酶對(duì)質(zhì)粒和含W基因的DNA片段進(jìn)行切割

質(zhì)粒：限制酶HindⅢ、MfeⅠ；含W基因的DNA片段：限制酶HindⅢ、EcoRⅠ

質(zhì)粒：限制酶HindⅢ、MfeⅠ；含W基因的DNA片段：限制酶HindⅢ、EcoRⅠ

？

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅢ
識(shí)別位點(diǎn)	↓5'-GAATTC-3'3'-CTTAAG-5'↑	↓5'-GGATCC-3'3'-CCTAGG-5'↑	↓5'-GGTACC-3'3'-CCATGG-5'↑	↓5'-CAATTG-3'3'-GTTAAC-5'↑	↓5'-AAGCTT-3'3'-TTCGAA-5'↑