現(xiàn)代生物技術(shù)。
脫氧核苷酸鏈?zhǔn)怯蟹较虻?，一端?'端，另一端為3'端，DNA分子兩條脫氧核苷酸鏈反向平行。DNA復(fù)制時(shí)，稱為引物的小段核苷酸鏈先與模板鏈配對(duì)結(jié)合，然后在引物的3'端進(jìn)行子鏈延伸，在引物的5'端不能進(jìn)行子鏈延伸（如圖1）。

（1）在圖1的數(shù)字編號(hào)①～③中，代表解旋過(guò)程的是 ，此過(guò)程中發(fā)生斷裂的鍵是 。
聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）可自動(dòng)化重復(fù)進(jìn)行圖1所示的①～③步驟，每完成一次①～③步驟稱為完成一個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)各步驟的反應(yīng)條件設(shè)計(jì)為：步驟①在94℃持續(xù)30秒，步驟②在55℃持續(xù)30秒，步驟③在72℃持續(xù)1分鐘。某研究小組擬用PCR技術(shù)和引物1、2從圖2所示DNA分子中擴(kuò)增出編碼蛋白質(zhì)H的基因，并開(kāi)展后續(xù)研究。

（2）下列關(guān)于PCR的敘述中，正確的是 。
A．PCR是檢測(cè)生物遺傳多樣性最可靠的方法
B．可從人體細(xì)胞提取DNA聚合酶用于PCR反應(yīng)
C．通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因?qū)儆诨瘜W(xué)方法人工合成
D．若引物能與模板DNA多個(gè)位置結(jié)合，則可提高PCR擴(kuò)增效率
（3）通過(guò)上述PCR反應(yīng)獲得目的基因片段后，擬將其插入質(zhì)粒pZHY1中構(gòu)建重組DNA分子pZHY2．已知在pZHY1上存在EcoRⅠ、BamHⅠ、KpnⅠ、XbaⅠ4種限制酶的識(shí)別序列（如表），則應(yīng)選用的限制酶組合是 。

EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	XbaⅠ
G↓AATTC CTTAA↑G	G↓GATCC CCTAG↑G	GGTAC↓C C↑CATGG	T↓CTAGA AGATC↑T

A．BamHⅠ和EcoRⅠ
B．BamHⅠ和KpnⅠ
C．EcoRⅠ和KpnⅠ
D．EcoRⅠ和XbaⅠ
（4）將重組DNA分子pZHY2導(dǎo)入大腸桿菌后，就可通過(guò)大規(guī)模培養(yǎng)大腸桿菌制備蛋白質(zhì)H．若要獲得純化的蛋白質(zhì)H，下列操作步驟中Ⅰ代表 ，Ⅱ代表 。
破碎細(xì)胞→過(guò)濾一Ⅰ→Ⅱ→通過(guò)冷凍干燥結(jié)晶蛋白質(zhì)
①改變pH沉淀蛋白質(zhì)
②加入硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)
③將蛋白質(zhì)進(jìn)行固定化
④通過(guò)層析提純蛋白質(zhì)
（5）若要制備抗蛋白質(zhì)H的單克隆抗體，相關(guān)說(shuō)法中正確的有 。（多選）
A．可以用上述步驟所得純化的蛋白質(zhì)H作為抗原免疫動(dòng)物
B．從動(dòng)物的脾臟收集B淋巴細(xì)胞，并使之與雜交瘤細(xì)胞融合
C．單克隆抗體是由單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞群分泌的成分單一的抗體
D．從PCR擴(kuò)增目的基因到制備單克隆抗體，共涉及基因工程、發(fā)酵工程、細(xì)胞工程

【考點(diǎn)】目的基因的篩選與獲取．

【答案】①；氫鍵；C；B；①②；④；ACD