24.現(xiàn)代生物技術(shù)。
脫氧核苷酸鏈是有方向的,一端為5'端,另一端為3'端,DNA分子兩條脫氧核苷酸鏈反向平行。DNA復(fù)制時,稱為引物的小段核苷酸鏈先與模板鏈配對結(jié)合,然后在引物的3'端進行子鏈延伸,在引物的5'端不能進行子鏈延伸(如圖1)。
(1)在圖1的數(shù)字編號①~③中,代表解旋過程的是
,此過程中發(fā)生斷裂的鍵是
。
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)可自動化重復(fù)進行圖1所示的①~③步驟,每完成一次①~③步驟稱為完成一個循環(huán),每個循環(huán)各步驟的反應(yīng)條件設(shè)計為:步驟①在94℃持續(xù)30秒,步驟②在55℃持續(xù)30秒,步驟③在72℃持續(xù)1分鐘。某研究小組擬用PCR技術(shù)和引物1、2從圖2所示DNA分子中擴增出編碼蛋白質(zhì)H的基因,并開展后續(xù)研究。
(2)下列關(guān)于PCR的敘述中,正確的是
。
A.PCR是檢測生物遺傳多樣性最可靠的方法
B.可從人體細胞提取DNA聚合酶用于PCR反應(yīng)
C.通過PCR擴增目的基因?qū)儆诨瘜W(xué)方法人工合成
D.若引物能與模板DNA多個位置結(jié)合,則可提高PCR擴增效率
(3)通過上述PCR反應(yīng)獲得目的基因片段后,擬將其插入質(zhì)粒pZHY1中構(gòu)建重組DNA分子pZHY2.已知在pZHY1上存在EcoRⅠ、BamHⅠ、KpnⅠ、XbaⅠ4種限制酶的識別序列(如表),則應(yīng)選用的限制酶組合是
。
EcoRⅠ |
BamHⅠ |
KpnⅠ |
XbaⅠ |
G↓AATTC CTTAA↑G |
G↓GATCC CCTAG↑G |
GGTAC↓C C↑CATGG |
T↓CTAGA AGATC↑T |
A.BamHⅠ和EcoRⅠ
B.BamHⅠ和KpnⅠ
C.EcoRⅠ和KpnⅠ
D.EcoRⅠ和XbaⅠ
(4)將重組DNA分子pZHY2導(dǎo)入大腸桿菌后,就可通過大規(guī)模培養(yǎng)大腸桿菌制備蛋白質(zhì)H.若要獲得純化的蛋白質(zhì)H,下列操作步驟中Ⅰ代表
,Ⅱ代表
。
破碎細胞→過濾一Ⅰ→Ⅱ→通過冷凍干燥結(jié)晶蛋白質(zhì)
①改變pH沉淀蛋白質(zhì)
②加入硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)
③將蛋白質(zhì)進行固定化
④通過層析提純蛋白質(zhì)
(5)若要制備抗蛋白質(zhì)H的單克隆抗體,相關(guān)說法中正確的有
。(多選)
A.可以用上述步驟所得純化的蛋白質(zhì)H作為抗原免疫動物
B.從動物的脾臟收集B淋巴細胞,并使之與雜交瘤細胞融合
C.單克隆抗體是由單個雜交瘤細胞增殖產(chǎn)生的雜交瘤細胞群分泌的成分單一的抗體
D.從PCR擴增目的基因到制備單克隆抗體,共涉及基因工程、發(fā)酵工程、細胞工程