如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出已知序列兩側(cè)的序列，具體流程如圖（以EcoRⅠ酶切為例）：

請據(jù)圖回答問題：
（1）步驟Ⅰ用的EcoRⅠ是一種

限制性核酸內(nèi)切（或限制）

限制性核酸內(nèi)切（或限制）

酶，它通過識別特定的

核苷酸序列

核苷酸序列

切割特定位點。
（2）步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′-羥基與5′-磷酸間形成

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

；PCR循環(huán)中，升溫到95℃是為了獲得

DNA單鏈

DNA單鏈

；Taq DNA聚合酶的作用是催化

以DNA為模板的DNA鏈的延伸

以DNA為模板的DNA鏈的延伸

。
（3）若下表所列為已知的DNA序列和設(shè)計的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是

②④

②④

（從引物①②③④中選擇，填編號）。

	DNA序列（虛線處省略了部分核苷酸序列）
已知序列
PCR引物	①5′-AACTATGCGCTCATGA-3′ ②5′-GCAATGCGTAGCCTCT-3′ ③5′-AGAGGCTACGCATTGC-3′ ④5′-TCATGAGCGCATAGTT-3′

（4）對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），結(jié)果正確的是

B

B

。
A．5′-AACTATGCG----------AGCCCTT-3′
B．5′-AATTCCATG----------CTGAATT-3′
C．5′-GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D．5′-TTGATACGC----------CGAGTAC-3′