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已知組成型啟動(dòng)子可以高效地啟動(dòng)目的基因在植物各種組織中的表達(dá),但常會(huì)阻礙植物的生長(zhǎng)發(fā)育。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可在特定環(huán)境條件下誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。沙冬青脫水素基因(AmDHN基因)能使植株具有較強(qiáng)的抗旱作用??蒲腥藛T通過(guò)構(gòu)建AmDHN基因表達(dá)載體,以培育耐旱苜蓿新品種,所用載體如圖1所示,請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
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限制酶 Be1Ⅰ SacⅠ BamHⅠ PstⅠ SmaⅠ
識(shí)別序列和酶切位點(diǎn) T↓GATCA GAGCT↓C G↓GATCC CTGCA↓G CCC↓GGG
(1)用載體1構(gòu)建含AmDHN目的基因的表達(dá)載體,可以成功轉(zhuǎn)化苜蓿,但會(huì)出現(xiàn)抑制抗性芽生長(zhǎng)和抗性植株生根的現(xiàn)象,推測(cè)35S啟動(dòng)子屬于
組成型
組成型
啟動(dòng)子。
(2)如表是科研人員擴(kuò)增Rd29A啟動(dòng)子所設(shè)計(jì)的引物,根據(jù)引物的堿基序列及限制酶的識(shí)別序列分析,構(gòu)建載體2時(shí)選用的限制酶是
SacⅠ和SmaⅠ
SacⅠ和SmaⅠ
。為了改造載體1中的啟動(dòng)子,需要用
BclⅠ和SacⅠ
BclⅠ和SacⅠ
酶切割載體1、2為最佳。
上游引物P1:5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3'
下游引物P2:5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3'
(3)構(gòu)建Rd29A啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)AmDHN基因的表達(dá)載體后,先將其導(dǎo)入
農(nóng)桿菌
農(nóng)桿菌
,再轉(zhuǎn)化苜蓿。轉(zhuǎn)化后應(yīng)在培養(yǎng)基中添加
新霉素
新霉素
進(jìn)行篩選。
(4)為檢測(cè)轉(zhuǎn)基因苜蓿中AmDHN基因的表達(dá)水平,科研人員做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。如表呈現(xiàn)了部分操作步驟,請(qǐng)完成表格:
實(shí)驗(yàn)步驟的目的 簡(jiǎn)要操作過(guò)程
    ①
使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境(進(jìn)行煉苗)材料處理
使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境(進(jìn)行煉苗)材料處理
在轉(zhuǎn)基因無(wú)菌苗根系長(zhǎng)至 2~3 cm 時(shí),將培養(yǎng)無(wú)菌苗三角瓶的封口膜打開,培養(yǎng)一周,觀察其生長(zhǎng)狀況
提供適宜生長(zhǎng)條件 將甲組幼苗根系置于300mL水中
模擬干旱脅迫條件
將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中
將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中
無(wú)關(guān)變量控制 將甲、乙兩組置于溫度、光照等條件適宜且相同的環(huán)境中培養(yǎng)8h,之后剪取兩組葉片放在液氮中儲(chǔ)存
檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量,估算目的基因的表達(dá)量
檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量,估算目的基因的表達(dá)量
對(duì)葉片研磨、離心后,提?、?!--BA-->
(總)RNA
(總)RNA
,以AmDHN和MtActin基因⑤
兩端脫氧核苷酸序列
兩端脫氧核苷酸序列
為依據(jù)設(shè)計(jì)引物,進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,其中MtActin(一種細(xì)胞骨架蛋白)為內(nèi)參。擴(kuò)增產(chǎn)物用⑥
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
檢測(cè),EB(溴化乙錠)染色照相如圖。
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【答案】組成型;SacⅠ和SmaⅠ;BclⅠ和SacⅠ;農(nóng)桿菌;新霉素;使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境(進(jìn)行煉苗)材料處理;將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中;檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量,估算目的基因的表達(dá)量;(總)RNA;兩端脫氧核苷酸序列;瓊脂糖凝膠電泳
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/8/3 8:0:9組卷:11引用:1難度:0.6
相似題
  • 1.科研小組利用基因工程技術(shù)將“抗蟲基因”轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞成功培育出抗蟲棉,該技術(shù)所用的含“抗蟲基因”的DNA與質(zhì)粒上相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)分別如圖1、圖2所示(不同限制酶的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn):BamHⅠ5′-GGATCC-3′,BclⅠ5′-TGATCA-3′,Sau3AⅠ5′-GATC-3′,HindⅢ5′-AAGCTT-3′)。請(qǐng)分析并回答以下問(wèn)題:
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    (1)將抗蟲基因轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞前,可以通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得大量抗蟲基因,PCR擴(kuò)增前應(yīng)根據(jù)
     
    設(shè)計(jì)引物。培育轉(zhuǎn)基因棉花的核心工作是
     
    。由圖1和圖2分析可知,研究人員應(yīng)選擇
     
    限制酶處理含抗蟲基因的DNA片段,在處理質(zhì)粒的時(shí)候應(yīng)選擇
     
    限制酶。
    (2)蛋白酶抑制劑基因也是一種抗蟲基因,某研究團(tuán)隊(duì)將胰蛋白酶抑制劑(NaPI)和胰凝乳蛋白酶抑制劑(StPin1A)的基因單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)化,獲得轉(zhuǎn)基因植株。
    ①將抗蟲基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)時(shí),除了采用我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的花粉管通道法,還可以采用
     
    法,使用該方法時(shí),應(yīng)將抗蟲基因插入到質(zhì)粒的
     
    區(qū)域。
    ②標(biāo)記基因可用于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入,由圖2可知,應(yīng)選含有
     
    的培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞。為了檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞中是否穩(wěn)定表達(dá),在分子水平上的檢測(cè)方法為
     
    。
    ③圖3為將胰蛋白酶抑制劑(NaPI)和胰凝乳蛋白酶抑制劑(StPin1A)的基因單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,據(jù)結(jié)果分析,
     
    (選填“NaPI”或“StpinlA”或“NaPI+StpinlA”)轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳,得出該結(jié)論的原因是
     

    發(fā)布:2024/11/19 5:30:2組卷:38引用:2難度:0.5
  • 2.某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列,并運(yùn)用交錯(cuò)延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組B基因,轉(zhuǎn)入煙草獲得成功,過(guò)程如圖所示。下列選項(xiàng)正確的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注:①交錯(cuò)延伸PCR:基因Bt1和Bt2均作為模板,所需引物相同,圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動(dòng)子Pr1a可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長(zhǎng)素合成酶基因是通過(guò)成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段,可使植物細(xì)胞合成生長(zhǎng)素。

    發(fā)布:2024/11/16 21:0:1組卷:36引用:2難度:0.5
  • 3.基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速,如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布:2024/11/14 7:0:1組卷:62引用:7難度:0.7
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