卵巢癌是全球第七大最常見(jiàn)的惡性腫瘤。為探究大蒜素對(duì)人卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。請(qǐng)完善以下實(shí)驗(yàn)思路，預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并進(jìn)行分析與討論。
（實(shí)驗(yàn)可選試劑：150μmol/L的大蒜素、300μmol/L的大蒜素、全培養(yǎng)液）回答下列問(wèn)題：
（1）完善實(shí)驗(yàn)思路
①將人卵巢癌細(xì)胞置于適宜的培養(yǎng)液中，并在37℃、5%CO
2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用
胰蛋白酶
胰蛋白酶
消化制成單細(xì)胞懸液，
離心
離心
后，棄上清液，用1mL全培養(yǎng)液重新制備懸細(xì)胞。②將懸細(xì)胞分為3組，分組情況如下：A組添加適量的150μmol/L的大蒜素、B組添加等量的300μmol/L的大蒜素、C組添加等量的全培養(yǎng)液作對(duì)照。
③分別在4h、8h、12h測(cè)定各組細(xì)胞的凋亡率，記錄并分析。
（2）預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（若實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在相同大蒜素濃度時(shí)，隨時(shí)間延長(zhǎng)，凋亡比例升高；在相同時(shí)間內(nèi)，給藥濃度越大，凋亡率相對(duì)越高。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)坐標(biāo)，以柱形圖形式表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果）：
（3）分析與討論：為進(jìn)一步研究大蒜素促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡的機(jī)理，可用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)大蒜素對(duì)Bax基因表達(dá)的影響，基本思路為：①取各組細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行
破碎
破碎
處理后，提取總RNA；②將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，將所獲得的cDNA作為
PCR擴(kuò)增的模板
PCR擴(kuò)增的模板
；③所有DNA經(jīng)相同次數(shù)循環(huán)后測(cè)定Bax基因的
濃度
濃度
。
