26.卵巢癌是全球第七大最常見的惡性腫瘤。為探究大蒜素對人卵巢癌細胞凋亡的影響及其機制。請完善以下實驗思路,預測實驗結果,并進行分析與討論。
(實驗可選試劑:150μmol/L的大蒜素、300μmol/L的大蒜素、全培養(yǎng)液)回答下列問題:
(1)完善實驗思路
①將人卵巢癌細胞置于適宜的培養(yǎng)液中,并在37℃、5%CO
2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
取對數(shù)生長期的細胞,用
消化制成單細胞懸液,
后,棄上清液,用1mL全培養(yǎng)液重新制備懸細胞。②將懸細胞分為3組,分組情況如下:A組添加適量的150μmol/L的大蒜素、B組添加等量的300μmol/L的大蒜素、C組添加等量的全培養(yǎng)液作對照。
③分別在4h、8h、12h測定各組細胞的凋亡率,記錄并分析。
(2)預測實驗結果(若實驗結果表明,在相同大蒜素濃度時,隨時間延長,凋亡比例升高;在相同時間內(nèi),給藥濃度越大,凋亡率相對越高。請設計一個坐標,以柱形圖形式表示實驗結果):
(3)分析與討論:為進一步研究大蒜素促進癌細胞凋亡的機理,可用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測大蒜素對Bax基因表達的影響,基本思路為:①取各組細胞,對其進行
處理后,提取總RNA;②將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,將所獲得的cDNA作為
;③所有DNA經(jīng)相同次數(shù)循環(huán)后測定Bax基因的
。