草甘膦是一種非選擇性除草劑，殺死雜草的同時(shí)也殺死農(nóng)作物。它與植物體內(nèi)的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）結(jié)構(gòu)相似，可與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶，阻止PEP轉(zhuǎn)化，影響植物細(xì)胞正常代謝。我國科學(xué)家從草甘膦施用土壤中的微生物體內(nèi)獲取草甘膦抗性基因GR29，并將其導(dǎo)入大豆體細(xì)胞中獲得抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因大豆。
（1）結(jié)合上述信息推測(cè)GR29發(fā)揮抗草甘膦作用的途徑可能是

GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶

GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶

。
（2）將GR29導(dǎo)入大豆細(xì)胞前，需將其與酶切后的質(zhì)粒P連接獲得

重組質(zhì)粒

重組質(zhì)粒

。因GR29基因序列兩端無所需的限制酶切位點(diǎn)，據(jù)圖1推測(cè)擴(kuò)增該基因時(shí)需向引物1和引物2的

5'端

5'端

（5'端/3'端）加上

PstI和XhoI

PstI和XhoI

限制酶的識(shí)別序列。

（3）熒光定量PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆中目的基因的定量檢測(cè)。在PCR反應(yīng)體系中，加入的熒光探針與模板DNA（目的基因）的某條鏈互補(bǔ)結(jié)合，當(dāng)合成的子鏈延伸至探針處，探針被酶切降解，熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)就會(huì)接收到熒光信號(hào)，具體原理如圖2所示。
①可通過檢測(cè)

熒光

熒光

判定待測(cè)植物中是否含有模板DNA，且熒光達(dá)到某一特定強(qiáng)度所需的循環(huán)次數(shù)越

少

少

，模板DNA含量越高。
②通過上述技術(shù)定量檢測(cè)目的基因，需從設(shè)計(jì)的多對(duì)引物和多種探針中選擇特異性最好的組合，為此需進(jìn)行多組實(shí)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組需向反應(yīng)體系中加入

a、d、e、f、h

a、d、e、f、h

。（填字母）
a.轉(zhuǎn)基因大豆的DNA模板
b.非轉(zhuǎn)基因大豆DNA模板
c.足量的待測(cè)引物
d.定量的待測(cè)引物
e.定量的待測(cè)熒光探針
f.熱穩(wěn)定DNA聚合酶
g.解旋酶
h.足量的脫氧核苷酸（dNTP）
③預(yù)期隨時(shí)間變化，熒光強(qiáng)度達(dá)到一定值后將不再增加，這是由于

DNA復(fù)制為半保留復(fù)制

DNA復(fù)制為半保留復(fù)制

。