1．全面接種新冠疫苗可有效防止新冠病毒的大規(guī)模傳染。新冠疫苗有多種類型，如滅活疫苗、重組疫苗、mRNA疫苗等。重組疫苗的研發(fā)可以利用腺病毒作為載體。請回答下列問題：
（1）新冠病毒依賴其表面的S蛋白與宿主細胞膜上ACE2受體結(jié)合而最終實現(xiàn)感染。ACE2受體的化學(xué)本質(zhì)是 。該結(jié)合過程體現(xiàn)了細胞膜 功能。
（2）新冠病毒是一種RNA病毒。研制疫苗時，需利用RT-PCR技術(shù)獲取S蛋白基因，該過程除逆轉(zhuǎn)錄酶外，還有 酶參與，此酶需要 （離子）的激活。PCR的最后一個循環(huán)結(jié)束后通常還需要在72℃維持7min左右，其目的是
（3）腺病毒是一種DNA病毒，基因組中的E基因與其復(fù)制有關(guān)。將其作為運載S蛋白基因的載體時，需對腺病毒進行的改造是 ，以提高該種新冠疫苗的安全性。
（4）接種滅活疫苗一般需2～3次，而接種重組DNA疫苗一般只需1次，根據(jù)疫苗作用原理和人體特異性免疫反應(yīng)機制分析，可能的原因是 。
（5）在基因組中敲除并整合基因，其技術(shù)流程通常如圖1所示。

①利用大腸桿菌DNA進行PCR，無需從細胞中提取DNA，可在培養(yǎng)出菌落后直接挑取菌落進行，分析其原因是 ，DNA得以釋放。
②利用PCR獲得對應(yīng)產(chǎn)物的關(guān)鍵是 設(shè)計。
③PCR5時需要加入的引物是 。
④利用電泳技術(shù)鑒定PCR產(chǎn)物，結(jié)果如圖2。其中陽性泳道使用的樣品是熒光基因M，可與待測泳道中DNA進行對比；標(biāo)準(zhǔn)泳道使用的樣品是不同已知長度（大?。┑腄NA片段，作用是 。

2．“微衛(wèi)星DNA”是一類廣泛分布于真核生物核DNA中的簡單重復(fù)序列，以1～6個核苷酸為基本單位，重復(fù)次數(shù)在不同個體和品種間有較大可變性，可作為一種標(biāo)記對基因進行定位。
（1）由于兩側(cè)序列高度保守，可利用PCR技術(shù)對重復(fù)次數(shù)不同的微衛(wèi)星DNA加以鑒定，如圖1．請在方框中補充C組PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果的大致位置。

（2）研究人員以純種紫心大白菜為父本、純種非紫心大白菜為母本進行雜交，F(xiàn)₁自交后共收獲F₂植株330株，其中紫心245株，非紫心85株。實驗結(jié)果表明是顯性性狀，推測相關(guān)基因的傳遞符合定律。
（3）為了對大白菜的紫心基因進行有效標(biāo)記和定位，研究人員針對已知的微衛(wèi)星標(biāo)記A710兩側(cè)序列設(shè)計引物，并對兩親本和部分F₂個體的DNA進行PCR擴增，產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2．由此初步推測：大白菜紫心、非紫心基因與標(biāo)記A710位于同一對染色體上。圖2紫心F₂單株中，最可能是雜合子的有（填數(shù)字編號）。若上述推測成立，請解釋非紫心F₂單株中10號和12號擴增后的電泳結(jié)果。
（4）研究人員發(fā)現(xiàn)，位于標(biāo)記A710附近的Br基因內(nèi)部存在CTC重復(fù)序列，且該序列在兩親本中重復(fù)次數(shù)不同，如圖3所示。對全部F₂個體中的Br基因片段進行PCR擴增，如果個體的擴增結(jié)果中有長度為78個堿基對的片段，個體的擴增結(jié)果中有長度為87個堿基對的片段，則可證明大白菜紫心和非紫心基因與Br基因位于同一對染色體上且完全連鎖，由此可知Br基因可對大白菜紫心基因進行更有效的標(biāo)記和定位。
（5）根據(jù)“微衛(wèi)星DNA”的特點判斷，應(yīng)用這種標(biāo)記可進行的研究有（填字母）。
A．人類親子鑒定              B．物種或品種間親緣關(guān)系鑒定
C．誘導(dǎo)基因突變              D．物種和基因多樣性研究

3．DNA分子雜交時，常需要大量的單鏈DNA探針。不對稱PCR是一種常見的單鏈DNA探針制備方法，其原理是反應(yīng)體系中加入一對數(shù)量不相等的引物。在PCR反應(yīng)的早期10-15個循環(huán)中，擴增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA，當(dāng)后期數(shù)量較少的限制性引物耗盡后，數(shù)量較多的非限制性引物將引導(dǎo)合成大量目標(biāo)DNA單鏈。

（1）若A鏈為所需的DNA分子探針，則非限制性引物應(yīng)選用引物 ；PCR反應(yīng)緩沖體系中一般要添加 以激活耐高溫的DNA聚合酶。
（2）進行最初10-15個循環(huán)的目的是 。如果體系中原模板DNA的數(shù)量為a,最初10次循環(huán)產(chǎn)物為雙鏈，后15次循環(huán)產(chǎn)物為單鏈，則最終獲得的單鏈探針數(shù)為 。因為DNA單鏈與雙鏈的分子量不同，可通過 將單鏈探針DNA分離出米。
（3）為精確控制產(chǎn)物生成量，科學(xué)家嘗試設(shè)計了較長的非限制性引物與較短的限制性引物，在進行一定的循環(huán)次數(shù)后，適當(dāng)提高復(fù)性溫度以避免殘留限制性引物與模板結(jié)合。高復(fù)性溫度條件下限制性引物不能結(jié)合模板鏈的原因是 。