人血清白蛋白（HSA）主要在肝臟中合成，具有重要的醫(yī)用價值。為制備大量的HSA，以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑如圖1所示；圖2中的甲為獲取的含有目的基因（HSA基因）的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的酶切位點；圖乙是三種限制酶的識別序列與酶切位點示意圖；圖丙是Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖?；卮鹣铝袉栴}：

（1）從人體細胞中直接提取的HSA基因，導(dǎo)入到大腸桿菌細胞中不能表達，原因可能是

真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別，轉(zhuǎn)錄不能正確起始；且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子，大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng)

真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別，轉(zhuǎn)錄不能正確起始；且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子，大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng)

。為了獲得能在大腸桿菌細胞中表達的HSA基因，可從人體的

肝臟

肝臟

細胞中提取mRNA，通過反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA（雙鏈），再利用PCR進行擴增，該過程需向反應(yīng)體系中加入

模板DNA

模板DNA

、

Taq聚合酶

Taq聚合酶

、4種脫氧核苷酸、引物和Mg²⁺，若擴增后得到了32個HSA基因，則該過程共需要

62

62

個引物。
（2）構(gòu)建基因表達載體時，不能選擇限制酶Sau3AⅠ切割目的基因，原因是

限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因

限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因

，為了防止目的基因與質(zhì)粒間的任意連接，應(yīng)選擇限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ切割質(zhì)粒，選擇限制酶

BamHⅠ、EcoRⅠ

BamHⅠ、EcoRⅠ

充分切割目的基因，質(zhì)粒上抗生素抗性基因的作用是

對目的基因是否導(dǎo)入進行檢測

對目的基因是否導(dǎo)入進行檢測

。
（3）將目的基因?qū)氪竽c桿菌時，常用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理細胞。為了檢測水稻胚乳細胞中是否合成了HSA蛋白，可用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

方法；若胚乳細胞中含有HSA基因，但是檢測不到HSA蛋白，原因可能是

目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想，導(dǎo)致目的基因不能正常表達

目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想，導(dǎo)致目的基因不能正常表達

。