23．人血清白蛋白（HSA）主要在肝臟中合成，具有重要的醫(yī)用價(jià)值。為制備大量的HSA，以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑如圖1所示；圖2中的甲為獲取的含有目的基因（HSA基因）的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的酶切位點(diǎn)；圖乙是三種限制酶的識(shí)別序列與酶切位點(diǎn)示意圖；圖丙是Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）從人體細(xì)胞中直接提取的HSA基因，導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞中不能表達(dá)，原因可能是
。為了獲得能在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)的HSA基因，可從人體的
細(xì)胞中提取mRNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA（雙鏈），再利用PCR進(jìn)行擴(kuò)增，該過(guò)程需向反應(yīng)體系中加入
、
、4種脫氧核苷酸、引物和Mg
2+，若擴(kuò)增后得到了32個(gè)HSA基因，則該過(guò)程共需要
個(gè)引物。
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，不能選擇限制酶Sau3AⅠ切割目的基因，原因是
，為了防止目的基因與質(zhì)粒間的任意連接，應(yīng)選擇限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ切割質(zhì)粒，選擇限制酶
充分切割目的基因，質(zhì)粒上抗生素抗性基因的作用是
。
（3）將目的基因?qū)氪竽c桿菌時(shí)，常用
處理細(xì)胞。為了檢測(cè)水稻胚乳細(xì)胞中是否合成了HSA蛋白，可用
方法；若胚乳細(xì)胞中含有HSA基因，但是檢測(cè)不到HSA蛋白，原因可能是
。
