牛和羊的瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物能分解尿素。某研究小組欲從瘤胃內(nèi)篩選出能高效降解尿素的細(xì)菌，設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)。
Ⅰ.取樣：從剛宰殺的牛的瘤胃中取樣，將樣品裝入事先滅過菌的錐形瓶中。
Ⅱ.培養(yǎng)基的配制和滅菌：
配制全營(yíng)養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基。配方：水、蛋白胨，酵母提取物，NaCl,瓊脂糖。（備注：瓊脂糖是一種鏈狀多糖，35-40℃時(shí)形成半固體狀凝膠，90℃以上溶解；瓊脂主要成分為瓊脂糖和果膠，還有少量含氮化合物等）
配制尿素固體培養(yǎng)基。配方：水、葡萄糖，NaCl,K2HPO4，尿素，酚紅，瓊脂糖。（備注：酚紅是一種酸堿指示劑，在酸性時(shí)呈黃色，堿性時(shí)呈紅色。）
Ⅲ.制備瘤胃稀釋液如圖并接種。
Ⅳ.在無氧條件下進(jìn)行微生物的培養(yǎng)、觀察與計(jì)數(shù)。
回答下列問題：
（1）尿素固體培養(yǎng)基需用瓊脂糖做凝固劑而不用瓊脂的原因是
瓊脂含有少量含氮化合物，為其他不能以尿素為氮源的微生物提供氮源，干擾篩選尿素分解菌
瓊脂含有少量含氮化合物，為其他不能以尿素為氮源的微生物提供氮源，干擾篩選尿素分解菌
。
（2）尿素培養(yǎng)基中加酚紅的原因是以尿素為氮源的微生物培養(yǎng)一段時(shí)間后，由于細(xì)菌產(chǎn)生的 脲酶
脲酶
向周圍擴(kuò)散，將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的 NH3
NH3
使培養(yǎng)基中的酚紅由黃色變成紅色。
（3）該小組采用稀釋涂布平板法對(duì)瘤胃中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板（2種平板）先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是 檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染
檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染
。經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h,觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果如表，其中 3、4
3、4
號(hào)試管的稀釋倍數(shù)比較合適（請(qǐng)從如圖中1～5號(hào)試管中選擇填寫）。
| 稀釋倍數(shù) |
1×103 |
1×104 |
1×105 |
1×106 |
1×107 |
| 菌落數(shù) |
＞500 |
367 |
248 |
36 |
18 |
（4）接下來，該小組對(duì)周圍紅色區(qū)域
大
大
（填“大”或“小”）的菌落進(jìn)行平板劃線法純化和分離，以便獲得單菌落。操作時(shí)，接種環(huán)通過
灼燒
灼燒
方法滅菌。在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是
將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落
將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落
。
