黑曲霉會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存的果蔬與谷物腐爛。因此抑制有害霉菌的生長(zhǎng)成為食品保藏及農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的首要任務(wù)??茖W(xué)家篩選出若干株對(duì)黑曲霉有較強(qiáng)抑制作用的菌株,并對(duì)其進(jìn)行初步研究?;卮鹣铝袉?wèn)題
(1)若要對(duì)黑曲霉抑菌菌株進(jìn)行篩選與純化,可利用
液體
液體
(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行富集培養(yǎng),然后對(duì)菌液進(jìn)行
梯度稀釋
梯度稀釋
,再涂布到黑曲霉生長(zhǎng)良好的培養(yǎng)基上,觀察是否出現(xiàn)
抑菌圈
抑菌圈
,然后再將出現(xiàn)抑菌能力最強(qiáng)的菌株進(jìn)行
篩選
篩選
純化培養(yǎng)。
(2)利用黑曲霉為病原指示菌,初篩出了形態(tài)差異較大的14株對(duì)黑曲霉有抑制作用的菌株,將其編號(hào)為L(zhǎng)G-1~LG-14,如圖1所示,應(yīng)挑選圖中的
LG-13
LG-13
菌株。但實(shí)踐發(fā)現(xiàn),上述菌株的抑菌效果還不太理想,若想獲得抑菌作用更好的菌株,還可采用
誘變育種或基因工程
誘變育種或基因工程
育種方法。
(3)現(xiàn)需要將某毒性基因(pobA基因)的啟動(dòng)子序列(dmp)插入圖2所示表達(dá)載體的B區(qū)對(duì)抑菌菌株進(jìn)行改造,從而提高抑菌菌株的抑菌效果。圖3顯示了啟動(dòng)子dmp內(nèi)部的酶切位點(diǎn),在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),應(yīng)在其C、D兩端添加兩種限制酶
XhoⅠ和NdeⅠ
XhoⅠ和NdeⅠ
的酶切位點(diǎn),確保
啟動(dòng)子不會(huì)被切斷、避免目的基因自身環(huán)化、避免載體自身環(huán)化、避免啟動(dòng)子反向連接到載體上
啟動(dòng)子不會(huì)被切斷、避免目的基因自身環(huán)化、避免載體自身環(huán)化、避免啟動(dòng)子反向連接到載體上
,并啟動(dòng)
轉(zhuǎn)錄
轉(zhuǎn)錄
過(guò)程。