血友病是一種伴X染色體隱性遺傳病，由于位于X染色體上的凝血因子基因（F基因）發(fā)生變異，患者血漿中凝血因子不足，因而頻繁發(fā)生自發(fā)性出血。基因治療是目前最有可能治愈血友病的療法。
（1）基因治療是利用基因工程的原理和方法，將

正常的F基因

正常的F基因

作為目的基因，以患者具有分裂分化能力的細胞為

受體細胞

受體細胞

，獲得能夠正常分泌凝血因子的細胞，再將其植入患者體內(nèi)。
（2）科研人員構(gòu)建了rAVV-F基因表達載體，體外轉(zhuǎn)化血友病模型小鼠的脂肪干細胞（ADSC）。載體及目的基因結(jié)構(gòu)如圖1。

用PCR的方法擴增目的基因，需選擇引物

②③

②③

。在構(gòu)建基因表達載體時，選擇限制酶

Asc I和Not I

Asc I和Not I

進行酶切，成功率更高。
（3）檢測轉(zhuǎn)化后的ADSC細胞中目的基因的表達水平。
①提取轉(zhuǎn)化后的ADSC細胞的

RNA進行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA

RNA進行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA

作為模板進行PCR，檢測目的基因在受體細胞中的轉(zhuǎn)錄水平，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2。?
據(jù)圖可知，

原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的細胞中，F(xiàn)基因均成功轉(zhuǎn)錄

原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的細胞中，F(xiàn)基因均成功轉(zhuǎn)錄

。
②欲檢測目的基因是否成功表達，還需檢測細胞培養(yǎng)液中

F蛋白的含量（F蛋白的活性）

F蛋白的含量（F蛋白的活性）

。
（4）對模型動物進行轉(zhuǎn)基因治療后，需進行

自發(fā)性出血次數(shù)

自發(fā)性出血次數(shù)

等個體水平的檢測。