人乳鐵蛋白(hLF)對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究,主要流程如下圖。圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn),neor為新霉素抗性基因,BLG基因?yàn)锽乳球蛋白基因,GFP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因。請(qǐng)回答下列問題。
(1)過程①中,不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR,是因?yàn)?
hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄(表達(dá))
hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄(表達(dá))
。熒光RT-PCR技術(shù)所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有 逆(反)轉(zhuǎn)錄酶
逆(反)轉(zhuǎn)錄酶
、Taq酶、熒光標(biāo)記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。
(2)在RT-PCR過程中,加入的引物需在 5′
5′
端添加 SalⅠ和BamHⅠ
SalⅠ和BamHⅠ
兩種限制酶的識(shí)別序列,便于hLF基因插入pEB中。利用RT-PCR技術(shù)獲取的目的基因 能
能
(填“能”或“不能”)在物種之間交流;該技術(shù)還可用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè),可提高檢測(cè)的靈敏度,原因是 增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量(或濃度),便于檢測(cè)
增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量(或濃度),便于檢測(cè)
。
(3)過程②中,hLF基因插入到BLG基因之后的目的是 使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)(或使目的基因表達(dá))
使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)(或使目的基因表達(dá))
;該過程中,兩個(gè)基因共用的調(diào)控元件是BLG基因的 啟動(dòng)子
啟動(dòng)子
。
(4)PEBL質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是 脂質(zhì)體介導(dǎo)
脂質(zhì)體介導(dǎo)
,依據(jù)的主要原理是 生物膜具有一定的流動(dòng)性
生物膜具有一定的流動(dòng)性
。
(5)將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng),再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞中 是否有綠色熒光
是否有綠色熒光
,以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。該過程 不能
不能
(填“能”或“不能”)區(qū)分普通質(zhì)?;蛑亟M質(zhì)粒。