人體移植器官短缺是一個(gè)世界性難題。目前科學(xué)家正試圖利用基因工程方法對(duì)哺乳動(dòng)物器官進(jìn)行改造,欲培育出沒(méi)有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆器官,設(shè)計(jì)操作過(guò)程如圖:
(1)過(guò)程一:獲取供體組織塊并剪碎后,需用
胰蛋白(或膠原蛋白)
胰蛋白(或膠原蛋白)
酶處理,使組織細(xì)胞分散。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要CO
2,其作用是
維持培養(yǎng)液的pH
維持培養(yǎng)液的pH
。
(2)過(guò)程二:Cas9作用于磷酸二酯鍵將α-Gal抗原基因從供體DNA中敲除,可判斷Cas9是
限制
限制
酶。將含有α-Gal抗原基因的DNA片段用放射性同位素標(biāo)記作為探針,使探針與②細(xì)胞的DNA雜交,若
不能顯示出雜交帶
不能顯示出雜交帶
,則表明該基因已成功敲除。
(3)過(guò)程三:將人類補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白基因用顯微注射技術(shù)導(dǎo)入受體細(xì)胞,在
Cas9(或限制酶)和DNA連接
Cas9(或限制酶)和DNA連接
酶的作用下,將該基因與②細(xì)胞的DNA進(jìn)行定點(diǎn)整合。檢測(cè)人類補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白基因是否成功表達(dá),可用
抗原一抗體雜交
抗原一抗體雜交
技術(shù)。
(4)過(guò)程五:核移植后的重組細(xì)胞可以發(fā)育成為基因修飾克隆供體是因?yàn)?!--BA-->
該重組細(xì)胞的細(xì)胞核遺傳物質(zhì)全部來(lái)自于基因修飾的供體,并且該動(dòng)物細(xì)胞核有全能性
該重組細(xì)胞的細(xì)胞核遺傳物質(zhì)全部來(lái)自于基因修飾的供體,并且該動(dòng)物細(xì)胞核有全能性
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