如圖為利用酵母菌“發(fā)酵”出新冠病毒疫苗的研發(fā)思路；圖中①-⑦表示過(guò)程，B處箭頭表示NcoⅠ、SphⅠ、NheⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)（四種酶的識(shí)別序列詳見(jiàn)表），標(biāo)記基因SUC2控制合成蔗糖酶，使P型酵母菌能利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存。
| 限制酶 |
NcoⅠ |
SphⅠ |
NheⅠ |
BamHⅠ |
| 識(shí)別序列和切割位點(diǎn) |
5’-C↓CATGG |
5’-GCATG↓C |
5’-G↓GATCC |
5’-G↓CTAGC |
（1）圖中①過(guò)程需要使用
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶先得到S蛋白的cDNA。擴(kuò)增該分子時(shí)，需要已知cDNA兩側(cè)的一段核苷酸序列，目的是
以便根據(jù)該序列合成引物
以便根據(jù)該序列合成引物
，每一輪循環(huán)需要依次經(jīng)過(guò)
變性、復(fù)性、延伸
變性、復(fù)性、延伸
三個(gè)階段。
（2）為使③過(guò)程順利進(jìn)行，需先使用限制酶
NheⅠ和NcoⅠ
NheⅠ和NcoⅠ
切割質(zhì)粒B。此處選用兩種限制酶對(duì)新冠病毒的S蛋白基因及質(zhì)粒進(jìn)行切割的目的是
防止S蛋白基因和載體自身環(huán)化，防止S蛋白基因與載體反向連接
防止S蛋白基因和載體自身環(huán)化，防止S蛋白基因與載體反向連接
（答出2點(diǎn)即可）。
（3）⑤過(guò)程主要是對(duì)成功導(dǎo)入質(zhì)粒B的P型酵母菌進(jìn)行篩選，此過(guò)程的主要操作是：
將轉(zhuǎn)化后的酵母菌接種在以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上進(jìn)行選擇培養(yǎng)
將轉(zhuǎn)化后的酵母菌接種在以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上進(jìn)行選擇培養(yǎng)
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