人乳鐵蛋白(hLF)對細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究,主要流程如圖。RT-PCR過程需先進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成DNA,然后再進(jìn)行PCR。圖中AseI、NheI、SalI、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn),neor為新霉素抗性基因,BLG基因?yàn)锽乳鐵蛋白基因,GFP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因?;卮鹣铝袉栴}:
(1)過程①中用到的酶是
逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶
,經(jīng)過程①得到的hLH基因不具有的結(jié)構(gòu)是 啟動(dòng)子、終止子、內(nèi)含子
啟動(dòng)子、終止子、內(nèi)含子
(至少答出2個(gè))。
(2)過程②需要用 SalⅠ和BamHⅠ
SalⅠ和BamHⅠ
酶處理pEB質(zhì)粒和添加了相應(yīng)識(shí)別序列的hLH基因,已獲得重組質(zhì)粒。
(3)過程②中,hLF基因插入到BLG基因之后的目的是 使hLF基因在山羊乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)(或使目的基因表達(dá))
使hLF基因在山羊乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)(或使目的基因表達(dá))
。GFP基因的作用是 用于篩選成功導(dǎo)入hLF基因的乳腺細(xì)胞
用于篩選成功導(dǎo)入hLF基因的乳腺細(xì)胞
。
(4)過程③中用到的脂質(zhì)體是由磷脂分子構(gòu)成的,脂質(zhì)體介導(dǎo)利用的原理是 膜的流動(dòng)性
膜的流動(dòng)性
。若要將hLF基因?qū)胫参锛?xì)胞中表達(dá),可采用的方法有 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法
(答2種)。