普通番茄細胞中存在能分解細胞壁的酶（由A基因編碼），因而成熟的番茄果實易軟化而不耐儲運。科學(xué)家們通過基因工程技術(shù)，導(dǎo)入目的基因B（位于環(huán)狀DNA上），可以使分解細胞壁的酶“沉默”，成功培育耐儲運的番茄新品種。研究人員將B基因轉(zhuǎn)入普通西紅柿，該過程所用的質(zhì)粒與B基因的DNA上相關(guān)限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示。限制性內(nèi)切核酸酶BamHⅠ、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ識別的堿基序列和酶切位點分別為G^↓GATCC、T^↓GATCA、^↓GATC、A^↓AGCTT?；卮鹣铝袉栴}：
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（1）圖1所示質(zhì)粒中沒有標注出來的結(jié)構(gòu)是

復(fù)制原點

復(fù)制原點

；啟動子的作用是

RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA

RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA

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（2）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建基因表達載體時，可以用限制酶BamHⅠ切割質(zhì)粒，用限制酶Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA片段，這樣做的原因是

目的基因應(yīng)位于自動子和終止子之間；為了防止目的基因和運載體的任意連接；BamHⅠ、BclⅠ的識別序列包含Sau3AⅠ的識別序列，因此應(yīng)選用限制酶BamHⅠ切制質(zhì)粒，選用Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA片段

目的基因應(yīng)位于自動子和終止子之間；為了防止目的基因和運載體的任意連接；BamHⅠ、BclⅠ的識別序列包含Sau3AⅠ的識別序列，因此應(yīng)選用限制酶BamHⅠ切制質(zhì)粒，選用Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA片段

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（3）將上述切開的質(zhì)粒與目的基因混合，加入DNA連接酶連接并成功導(dǎo)入受體細胞（不考慮基因突變），將受體細胞放入培養(yǎng)基中進行篩選，則受體細胞的表型包含

ABD

ABD

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A.抗X、抗Y
B.抗X、不抗Y
C.不抗X、抗Y
D.不抗X、不抗Y
（4）目的基因可用PCR技術(shù)進行體外擴增，與體內(nèi)DNA復(fù)制不同，PCR過程中解旋的方法是

提高溫度使目的基因DNA受熱變性解旋為單鏈

提高溫度使目的基因DNA受熱變性解旋為單鏈

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