為生產(chǎn)具有特定性能的α-淀粉酶,研究人員從某種海洋細菌中利用PCR克隆了α-淀粉酶基因,利用基因工程大量制備α-淀粉酶,流程如圖所示。請回答下列問題:
(1)科研人員利用PCR克隆α-淀粉酶基因時,引物在擴增過程中的作用是
與模板鏈結(jié)合,使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸
與模板鏈結(jié)合,使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸
。
(2)構(gòu)建重組表達載體時,應使用 T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
(酶)“縫合”α-淀粉酶基因和表達載體。若將重組表達載體導入大腸桿菌,則大腸桿菌需經(jīng)Ca2+處理,使其處于一種能 吸收周圍環(huán)境中DNA分子
吸收周圍環(huán)境中DNA分子
的生理狀態(tài)。
(3)篩選分解淀粉能力強的工程菌時,常用 稀釋涂布平板法
稀釋涂布平板法
(填“稀釋涂布平板法”或“平板劃線法”)進行篩選,菌株應接種在以淀粉為 唯一碳源
唯一碳源
的培養(yǎng)基上,篩選時并不能僅僅以降解圈的大小為觀察指標,原因可能是 菌體繁殖力不同,菌落中菌體的數(shù)量存在差異,形成的菌落大小不同
菌體繁殖力不同,菌落中菌體的數(shù)量存在差異,形成的菌落大小不同
。
(4)若對工程菌生產(chǎn)的α-淀粉酶進行產(chǎn)品分析,還需要進行的工作有 某些基本特性重新確定:如酶能耐受的溫度(或pH)范圍、催化反應的最適溫度(或pH);酶活力大小的測定;建立規(guī)?;a(chǎn)時該酶的技術(shù)體系、評估生產(chǎn)成本等
某些基本特性重新確定:如酶能耐受的溫度(或pH)范圍、催化反應的最適溫度(或pH);酶活力大小的測定;建立規(guī)?;a(chǎn)時該酶的技術(shù)體系、評估生產(chǎn)成本等
(答出1點)。