高粱是我國重要的糧食作物，但其賴氨酸含量較低。天冬氨酸激酶（AK）和二氫吡啶羧酸合酶（DHPS）是賴氨酸合成途徑中兩種重要的酶，并協(xié)同控制植物中游離賴氨酸的合成速率。科學(xué)家把來源于細(xì)菌的外源AK和DHPS基因與胚乳特異性啟動子導(dǎo)入高粱，獲得游離賴氨酸含量顯著增加的高粱植株。請回答相關(guān)問題。
（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體過程中，選用兩種限制酶同時(shí)處理目的基因和質(zhì)粒，其優(yōu)點(diǎn)是

目的基因和質(zhì)粒的正向連接，避免發(fā)生質(zhì)粒和目的基因的自連和反向連接

目的基因和質(zhì)粒的正向連接，避免發(fā)生質(zhì)粒和目的基因的自連和反向連接

，構(gòu)建基因表達(dá)載體還需要的工具酶是

DNA連接酶

DNA連接酶

。AK基因和DHPS基因上游的胚乳特異性啟動子是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。
（2）將目的基因?qū)敫吡患?xì)胞最常用的方法是

花粉管通道法

花粉管通道法

，目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后需要

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

利用技術(shù)才能獲得轉(zhuǎn)基因植株。
（3）目的基因的檢測與鑒定，用PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因植株中目的基因是否成功轉(zhuǎn)錄出mRNA，首先從轉(zhuǎn)基因高粱植株的

胚乳細(xì)胞

胚乳細(xì)胞

中提取mRNA，然后通過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

得到cDNA，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，圖1是對擴(kuò)增產(chǎn)物電泳的結(jié)果，植株

4、5、7

4、5、7

（填數(shù)字）中AK基因和DHPS基因都轉(zhuǎn)錄成功。?
（4）圖2為野生高粱細(xì)胞內(nèi)賴氨酸合成與分解代謝的部分過程。細(xì)菌基因編碼的AK和DPHS對賴氨酸濃度不敏感，據(jù)此分析轉(zhuǎn)基因植株賴氨酸含量較高的原因

基因編碼的AK和DPHS對賴氨酸濃度不敏感，因而賴氨酸合成過程不會因?yàn)橘嚢彼岷可仙灰种?/div>

基因編碼的AK和DPHS對賴氨酸濃度不敏感，因而賴氨酸合成過程不會因?yàn)橘嚢彼岷可仙灰种?/div>。LKR和SDH是賴氨酸分解代謝的關(guān)鍵酶，據(jù)此再提出一點(diǎn)利用基因工程思路提高高粱賴氨酸含量的方法是

設(shè)法改造或敲除控制LKR合成的相關(guān)基因，從而減少賴氨酸的分解過程，進(jìn)而提高賴氨酸的含量

設(shè)法改造或敲除控制LKR合成的相關(guān)基因，從而減少賴氨酸的分解過程，進(jìn)而提高賴氨酸的含量

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