里氏木霉能高效表達并分泌纖維二糖水解酶Ⅰ(由cbh1基因編碼)等多種蛋白質(zhì),且不會產(chǎn)生對人體有害的毒素。中國科學(xué)家用里氏木霉作為受體細胞成功表達出Nb20(一種高親和性抗新冠病毒抗體)。操作流程如圖。
回答下列問題:
(1)纖維二糖水解酶Ⅰ是土壤微生物分解纖維素所需酶之一,推測里氏木霉在生態(tài)系統(tǒng)中屬于
分解者
分解者
。與大腸桿菌相比,采用里氏木霉作為工程菌可以生產(chǎn)結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜的藥用蛋白,推測其原因是 產(chǎn)物需經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體加工后分泌
產(chǎn)物需經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體加工后分泌
。
(2)pUC19質(zhì)粒是經(jīng)人工改造過的一種載體質(zhì)粒,一般要利用 PCR
PCR
技術(shù)擴增以備用。
(3)Nb20編碼基因插入至cbh1基因啟動子下游的目的是 驅(qū)動轉(zhuǎn)錄、實現(xiàn)目的基因的高效表達并分泌目標蛋白
驅(qū)動轉(zhuǎn)錄、實現(xiàn)目的基因的高效表達并分泌目標蛋白
;構(gòu)建的表達載體還需要的結(jié)構(gòu)有 復(fù)制原點、標記基因、終止子
復(fù)制原點、標記基因、終止子
(答出兩點即可)。
(4)培養(yǎng)液中非目標蛋白較多,導(dǎo)致目標蛋白(Nb20)的純度和特異性不足,為提高目標蛋白的純度,從基因角度思考,改造里氏木霉可采取的思路是 對非目標蛋白質(zhì)的編碼基因進行基因敲除
對非目標蛋白質(zhì)的編碼基因進行基因敲除
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