基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原（HBsAg）亞單位疫苗，制作過程是采用現(xiàn)代生物技術(shù)將乙肝病毒表達(dá)表面抗原的基因進(jìn)行質(zhì)粒構(gòu)建，將其導(dǎo)入CHO細(xì)胞（中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞）中，通過培養(yǎng)這種CHO細(xì)胞來表達(dá)乙肝表面抗原亞單位，從而獲得疫苗，基本流程如圖1所示。請(qǐng)回答下列問題。
（1）要獲取HBsAg基因，除圖中方法外，還可以根據(jù)表面抗原蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測(cè)
氨基酸序列
氨基酸序列
，進(jìn)而推測(cè)目的基因的脫氧核苷酸序列，再進(jìn)行人工合成。
（2）圖中①過程選用的限制酶是HindⅢ和XhoⅠ
HindⅢ和XhoⅠ
，理由是HBsAg基因含有限制酶HindⅢ、SamⅠ和XhoⅠ的切割位點(diǎn)，但限制酶SamⅠ的切割位點(diǎn)位于目的基因上，若選用限制酶SmaⅠ則會(huì)破壞目的基因
HBsAg基因含有限制酶HindⅢ、SamⅠ和XhoⅠ的切割位點(diǎn)，但限制酶SamⅠ的切割位點(diǎn)位于目的基因上，若選用限制酶SmaⅠ則會(huì)破壞目的基因
。
（3）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增HBsAg基因片段的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列
要有一段已知目的基因的核苷酸序列
，以便合成引物。圖2是某同學(xué)設(shè)計(jì)的一組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）：
該組引物是否合理否
否
，理由是引物Ⅱ自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)，這影響了與模板的堿基互補(bǔ)配對(duì)
引物Ⅱ自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)，這影響了與模板的堿基互補(bǔ)配對(duì)
。
（4）若一個(gè)HBsAg基因通過PCR擴(kuò)增了4次，在子代基因中同時(shí)含有兩個(gè)引物的基因占。
（5）HBsAg基因在CHO細(xì)胞中表達(dá)需要有特異性的啟動(dòng)子
啟動(dòng)子
，控制基因表達(dá)的起始時(shí)間和表達(dá)程度。HBsAg基因能否在CHO細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是CHO細(xì)胞的DNA上是否插入了HBsAg基因
CHO細(xì)胞的DNA上是否插入了HBsAg基因
。【答案】氨基酸序列；HindⅢ和XhoⅠ；HBsAg基因含有限制酶HindⅢ、SamⅠ和XhoⅠ的切割位點(diǎn)，但限制酶SamⅠ的切割位點(diǎn)位于目的基因上，若選用限制酶SmaⅠ則會(huì)破壞目的基因；要有一段已知目的基因的核苷酸序列；否；引物Ⅱ自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)，這影響了與模板的堿基互補(bǔ)配對(duì)；
；啟動(dòng)子；CHO細(xì)胞的DNA上是否插入了HBsAg基因
