轉(zhuǎn)基因重組醇母乙肝疫苗是一種乙肝表面抗原（HBsAg）亞單位疫苗。選用組氨酸脫氫酶基因（His）缺失突變體的巴斯德華赤酵母作受體細(xì)胞，它能以甲醇作為唯一碳源，但需要在添加組氨酸的培養(yǎng)基上才能存活。下圖所示質(zhì)粒中的5'AOX1、3'AOX1（TT）是強(qiáng)啟動(dòng)子序列和終止子序列，請回答下列問題。
限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)
| 限制酶 |
SnaBⅠ |
BglⅡ |
Avrli |
SacⅠ |
| 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) |
5'TACIGTA3' |
5'AIGATCT3' |
5'CICTAGG3' |
5'CITCGAG3' |
（1）圖示質(zhì)粒中含有的卡那霉素抗性基因kan
r、氨芐青霉素抗性基因amp
r在基因工程中一般作為
標(biāo)記基因
標(biāo)記基因
，有利于重組質(zhì)粒的篩選。質(zhì)粒中需具有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，其作用是
以便與外源基因連接
以便與外源基因連接
。
（2）據(jù)圖和表分析，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，HBsAg基因的B位置需接上
5'CCTAGG3'
5'CCTAGG3'
（填相應(yīng)末端的堿基序列）。經(jīng)過限制酶酶切的質(zhì)粒與HBsAg基因在進(jìn)行連接時(shí)，可選用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
連接。
（3）圖中步驟1一般先用Ca
2+處理大腸桿菌，使其處于
能吸收周圍環(huán)境中DNA分子
能吸收周圍環(huán)境中DNA分子
的生理狀態(tài)。由步驟2的結(jié)果分析，步驟1將重組質(zhì)粒先導(dǎo)入大腸桿菌有利于HBsAg基因在受體細(xì)胞中
增殖
增殖
。
（4）步驟3中應(yīng)選用限制酶
BglⅡ
BglⅡ
切割從大腸桿菌中分離的重組質(zhì)粒，從而獲得圖示重組DNA片段，然后將其整合到His缺失突變體酵母細(xì)胞基因組中，在不含
組氨酸
組氨酸
的培養(yǎng)基中篩選出成功導(dǎo)入了HBsAg基因的酵母細(xì)胞。
（5）與細(xì)菌相比，酵母菌更適宜作為受體細(xì)胞制備HBsAg亞單位疫苗，原因是
酵母菌為真核生物，具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)進(jìn)行加工，而細(xì)菌沒有各種細(xì)胞器（除了核糖體），不形成分泌蛋白
酵母菌為真核生物，具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)進(jìn)行加工，而細(xì)菌沒有各種細(xì)胞器（除了核糖體），不形成分泌蛋白
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