科研人員為探究某藥物抗肺癌的作用機(jī)理，進(jìn)行了一系列動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和該藥物藥理實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，需要使用
胰蛋白
胰蛋白
酶。使用的目的是將組織分散成單個(gè)細(xì)胞；由于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)具有 貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制
貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制
現(xiàn)象，因此也需要使用該酶處理，然后分瓶培養(yǎng)，該培養(yǎng)過(guò)程稱為 傳代
傳代
培養(yǎng)。
（2）為防止肺癌細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生污染，需要加入抗生素；同時(shí)還要提供適宜的溫度、pH、O2 和CO2等環(huán)境條件。此外，每48h更換一次培養(yǎng)液，目的是 提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害
提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害
。
（3）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（簡(jiǎn)稱TopoⅡ）為真核生物所必需，在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等方面發(fā)揮重要作用，TopoⅡ在腫瘤細(xì)胞中含量明顯高于正常細(xì)胞。用該藥物處理肺癌細(xì)胞48h后，采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)TopoⅠ基因的表達(dá)情況，結(jié)果如下：
| 該藥物濃度 |
0 |
0.10 |
0.20 |
0.40 |
| TopoⅡ基因表達(dá)量 |
++++++ |
++++ |
++ |
+ |
①逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的主要原理是：提取肺部癌細(xì)胞中的總RNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成
cDNA
cDNA
，再以其為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。為完成PCR擴(kuò)增需要添加
引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸
引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸
。
②由此可知，該藥物在分子水平上影響肺癌細(xì)胞的作用機(jī)理是
抑制TopoⅡ基因的轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致TopoⅡ含量降低，且藥物濃度越高，抑制作用越強(qiáng)
抑制TopoⅡ基因的轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致TopoⅡ含量降低，且藥物濃度越高，抑制作用越強(qiáng)
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