營養(yǎng)缺陷型菌株是指野生型菌株經(jīng)過人工誘變或自然突變失去合成某種營養(yǎng)的能力，只有在基本培養(yǎng)基中補(bǔ)充所缺乏的營養(yǎng)因子后才能生長的菌株，包括氨基酸缺陷型菌株、維生素缺陷型菌株和堿基缺陷型菌株等。篩選營養(yǎng)缺陷型菌株的常規(guī)步驟為：誘變育種→淘汰野生型→檢出缺陷型→鑒定缺陷型。
（1）用紫外線誘變大腸桿菌，誘變后常采用選擇培養(yǎng)基淘汰野生型大腸桿菌，使?fàn)I養(yǎng)缺陷型大腸桿菌得以富集。培養(yǎng)大腸桿菌時，需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至

中性或弱堿

中性或弱堿

性，再在壓力和溫度分別為

100kPa,121℃

100kPa,121℃

的條件下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。
（2）夾層平板培養(yǎng)法可用于營養(yǎng)缺陷型菌株的檢出，其原理如圖1所示，先在培養(yǎng)皿上倒一薄層基本培養(yǎng)基，凝固后再接種一層誘變處理的菌液，其上再澆一層基本培養(yǎng)基，凝固后放入

恒溫培養(yǎng)箱

恒溫培養(yǎng)箱

中培養(yǎng)出菌落，再倒一層完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。若結(jié)果如圖2所示，其中菌落

B

B

（填“A”或“B”）即為檢出的營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌菌株。

（3）研究小組一利用生長圖譜法初步確定檢出的營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌的類型，即在基本培養(yǎng)基乙的A～E這5個區(qū)域中分別添加不同的營養(yǎng)物質(zhì)，然后用

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

法將檢出的營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌接種在圖3培養(yǎng)基上，若培養(yǎng)一段時間后在圖3的BC交界處長出了菌落，則說明該菌株是

ab

ab

。
a.氨基酸缺陷型菌株
b.維生素缺陷型菌株
c.堿基缺陷型菌株
（4）研究小組二用上述方法鑒定了某菌株屬于維生素營養(yǎng)缺陷型，為了進(jìn)一步確定該菌株的具體類型，他們把15種維生素按照不同組合分為5個小組，用5個濾紙片分別蘸取不同小組的維生素，然后覆于接種后的瓊脂平板上培養(yǎng)一段時間。

組別	維生素組合
1	維生素A	維生素B1	維生素B2	維生素B6	維生素B12
2	維生素C	維生素B1	維生素D2	維生素E	煙酰胺
3	葉酸	維生素B2	維生素D2	膽堿	泛酸鈣
4	對氨基苯甲酸	維生素B6	維生素E	膽堿	肌醇
5	生物素	維生素12	煙酰胺	泛酸鈣	肌醇

若觀察到1組和2組濾紙片周圍產(chǎn)生生長圈（圖4），則該營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌不能合成的維生素是

維生素B₁

維生素B₁

；若菌株為葉酸和生物素的雙營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌，則其在圖4培養(yǎng)基上形成菌落的位置是

3與5的交界處

3與5的交界處

。