塑料制品方便人們生活的同時，也造成了短時期難以降解的“白色污染”。研究人員欲比較腸桿菌YT1和芽孢桿菌YP1兩類細(xì)菌降解塑料（主要成分為聚氯乙烯（PVC）、聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等，兩類細(xì)菌主要降解PE）的能力，并通過基因工程拼接黃粉蟲腸道內(nèi)菌株WZ的降解PVC的胞外酶基因CD3D，培育降解塑料的“超級菌”。
（1）菌株的篩選。配制固體培養(yǎng)基，接種菌株后表層覆蓋0.1mm厚度的PE塑料。分組實驗結(jié)果如圖所示：

培養(yǎng)基及接種菌株	培養(yǎng)基1	培養(yǎng)基2	培養(yǎng)基3
	單獨培養(yǎng)并接種YT1	單獨培養(yǎng)并接種YP1	混合培養(yǎng)YT1和YP1后，選取YP1接種
降解圈（直徑D/mm）	3.5	1.8	4.2

①在篩選分解PE塑料能力大小的菌株時，應(yīng)將兩類菌株接種到以

PE塑料

PE塑料

為唯一碳源的培養(yǎng)基，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于

選擇培養(yǎng)基

選擇培養(yǎng)基

。
②篩選分解PE塑料能力強的菌株不能直接以降解圈的大小為指標(biāo)，其原因是

因為菌體繁殖力不同，形成的菌落大小不同

因為菌體繁殖力不同，形成的菌落大小不同

。培養(yǎng)基3中接種混合培養(yǎng)后的YP1，其降解圈直徑明顯加大，其原因可能是

YP1和YT1混合培養(yǎng)過程中，YP1菌株整合了YT1的對PE塑料高分解力的基因，發(fā)生了轉(zhuǎn)化

YP1和YT1混合培養(yǎng)過程中，YP1菌株整合了YT1的對PE塑料高分解力的基因，發(fā)生了轉(zhuǎn)化

。
（2）培育“超級菌”。對菌株WZ改造后的CD3D基因進(jìn)行研究，把CD3D基因和His標(biāo)簽基因（His標(biāo)簽由6個組氨酸組成）連接起來構(gòu)建融合基因，并構(gòu)建重組基因表達(dá)載體，如圖為載體、CD3D基因的結(jié)構(gòu)、不同限制酶的識別序列及切割位點，欲將標(biāo)簽基因連接在CD3D基因編碼區(qū)的末端，已知組氨酸的密碼子為CAU，終止密碼子為UAG。

限制酶識別序列及切割位點：MunⅠ：CAATTG、XhoⅠ：CTCGAG、BcoRⅠ：G↓AATTC、SalⅠ：G↓TCGAC
①寫出His的基因編碼鏈的堿基序列5′

CATCATCATCATCATCATTAG

CATCATCATCATCATCATTAG

3′。
②為構(gòu)建融合基因并將其插入載體，科研人員設(shè)計了一對與CD3D基因編碼區(qū)兩端序列互補配對的引物，設(shè)計時需在引物

B

B

（填“A”或“B”）的5′端增加相應(yīng)的限制酶識別序列和His基因的編碼序列，請寫出該引物開頭的12個堿基序列：5′

CTCGAGCTAATG

CTCGAGCTAATG

3′。