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膠原蛋白在維持器官、組織、細(xì)胞等方面發(fā)揮著關(guān)鍵性作用，傳統(tǒng)提取方法得到的膠原蛋白成分復(fù)雜，還可能攜帶動(dòng)物病毒等?？茖W(xué)家將合成膠原蛋白的基因kit導(dǎo)入大腸桿菌構(gòu)建基因工程菌，過程如圖1所示。請據(jù)圖回答下列問題：
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（1）圖中①過程需要使用
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶，②過程需要用到的酶有
限制酶
限制酶
和
DNA連接酶
DNA連接酶
，前者可以切斷兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。
（2）用圖中方法得到的kit基因較少，可以采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，已知kit基因的部分序列如下：
5'-CGGG ATCCALLAGAATTCCG-3'
3'-GCCCTAGGTLLTCTTAAGGC-5'
根據(jù)上述序列設(shè)計(jì)引物為
BC
BC
（填字母），以
BamHⅠ和EcoRⅠ
BamHⅠ和EcoRⅠ
（填限制酶）進(jìn)行雙酶切kit基因與質(zhì)粒pET-28a（+），為了實(shí)現(xiàn)目的基因與運(yùn)載體的連接，則需要在引物的
5’
5’
端添加限制酶識別序列。
A．5'-GCCCTAGGT-3'B．5'-CGGAATTCT-3'
C．5'-CGGGATCCA-3'D．5'-GCCTTAAGA-3'
（3）為了使重組質(zhì)粒更易進(jìn)入大腸桿菌，可以用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌，若要檢測kit基因是否在大腸桿菌體內(nèi)發(fā)揮作用，首先需要檢測大腸桿菌的
RNA
RNA
（選填“DNA”或“RNA”）。
（4）雙酶切kit基因，與質(zhì)粒pET-28a（+）長度為170bp片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a（+）-kit,上述兩種質(zhì)粒在HindⅢ酶切后片段長度如下表所示，
質(zhì)粒類型 pET-28a（+） pET-28a（+）-kit
HindⅢ酶切片段 1000bp、2550bp 1000bp、2000bp、700bp
則kit基因長度為
320bp
320bp
，由此判定kit基因上有2個(gè)HindⅢ酶切位點(diǎn)，原因是
pET-28a（+）原有的兩個(gè)HindⅢ位點(diǎn)被目的基因置換走一個(gè)后，得到環(huán)狀的pET-28a（+）-kit仍然被HindⅢ限制酶切割成3段
pET-28a（+）原有的兩個(gè)HindⅢ位點(diǎn)被目的基因置換走一個(gè)后，得到環(huán)狀的pET-28a（+）-kit仍然被HindⅢ限制酶切割成3段
。
（5）菌液PCR是直接以菌體熱解后的DNA為模板、以目基因兩端序列為引物進(jìn)行擴(kuò)增的方法，根據(jù)凝膠電泳結(jié)果可初步鑒定菌落是否含有目的基因。對構(gòu)建的基因工程菌進(jìn)行菌液PCR驗(yàn)證，根據(jù)初步驗(yàn)證的結(jié)果提取大腸桿菌的質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切再驗(yàn)證，結(jié)果如圖2所示。分析可知，基因工程菌的構(gòu)建
是
是
（選填“是”或“否”）成功，原因是
菌落PCR與質(zhì)粒雙酶切均獲得大小約為320bp的基因片段
菌落PCR與質(zhì)粒雙酶切均獲得大小約為320bp的基因片段
。

【答案】逆轉(zhuǎn)錄；限制酶；DNA連接酶；BC；BamHⅠ和EcoRⅠ；5’；Ca2+；RNA；320bp；pET-28a（+）原有的兩個(gè)HindⅢ位點(diǎn)被目的基因置換走一個(gè)后，得到環(huán)狀的pET-28a（+）-kit仍然被HindⅢ限制酶切割成3段；是；菌落PCR與質(zhì)粒雙酶切均獲得大小約為320bp的基因片段
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/7/19 8:0:9組卷：8引用：2難度：0.6
相似題

  • 1．用限制酶EcoRⅤ單獨(dú)切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個(gè)堿基對）的長鏈，而同時(shí)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個(gè)黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　　）

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會(huì)引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動(dòng)DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實(shí)驗(yàn)操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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