[生物——選修1:生物技術(shù)實踐]
我國北方地區(qū)秋冬兩季平均氣溫較低,低溫環(huán)境使得秸稈難以自然降解,因此篩選低溫下高效木質(zhì)素降解菌具有重要的生產(chǎn)價值。已知木質(zhì)素能與苯胺藍結(jié)合形成藍色復(fù)合物?;卮鹣铝袉栴}:
(1)將5.0g土壤樣品加入200mL緩沖液中,15℃、120r/min振蕩混勻3h。靜置1h后取上清液分別稀釋到10
1~10
9倍,取0.1mL稀釋液采用
稀釋涂布平板
稀釋涂布平板
法分別接種到含木質(zhì)素的培養(yǎng)基上;從功能上講,含木質(zhì)素的培養(yǎng)基屬于
選擇
選擇
培養(yǎng)基。
(2)采用苯胺藍培養(yǎng)基篩選木質(zhì)素降解菌時,根據(jù)培養(yǎng)基上
有無透明圈和透明圈的直徑
有無透明圈和透明圈的直徑
可初步篩選出產(chǎn)木質(zhì)素降解酶能力強的菌株,此過程中篩選的原理是
木質(zhì)素能與苯胺藍結(jié)合形成藍色復(fù)合物,當木質(zhì)素被木質(zhì)素降解菌分解后,藍色復(fù)合物就無法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以木質(zhì)素降解菌為中心的透明圈
木質(zhì)素能與苯胺藍結(jié)合形成藍色復(fù)合物,當木質(zhì)素被木質(zhì)素降解菌分解后,藍色復(fù)合物就無法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以木質(zhì)素降解菌為中心的透明圈
。
(3)對初篩的木質(zhì)素降解菌進一步分離純化時,還可采用平板劃線法,分區(qū)劃線時應(yīng)注意不要將最后一區(qū)的劃線與
第一劃線區(qū)域相連
第一劃線區(qū)域相連
。接種后的平板應(yīng)
倒置
倒置
放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(4)若要分離培養(yǎng)液中的木質(zhì)素降解酶,可采用電泳法。電泳法的原理是利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及
分子本身的大小、形狀的不同的不同
分子本身的大小、形狀的不同的不同
,使帶電分子產(chǎn)生不同的
遷移速率
遷移速率
,從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。