2022年12月7日，疫情防控“新十條”發(fā)布，從此，全員核酸檢測成為了歷史。核酸檢測報告單結(jié)果分為檢出和未檢出，即陽性和陰性。RT-PC℉檢測大規(guī)模應(yīng)用于新冠感染篩查中。其檢測流程包括核酸提取、擴增、數(shù)據(jù)處理及報告，整個流程需4小時或更長時間，其速度快、操作流程簡單、滿足大規(guī)模的篩查以快速獲得新型冠狀病毒核酸是否為陽性的初步證據(jù)。RT-PCR加入Taqman熒光探針可以通過測定熒光強度來檢測產(chǎn)物濃度，原理如下：Taqman熒光探針為一段與目的基因互補的核苷酸單鏈，兩端分別連接一個熒光基團R和一個淬滅基團Q。探針結(jié)構(gòu)完整時，R發(fā)射的熒光被Q吸收；而PCR擴增時結(jié)合在模板鏈上的探針被切斷，使R和Q分離，R基團發(fā)射的熒光不被淬滅，這樣通過對熒光信號強弱的監(jiān)測就可實現(xiàn)對產(chǎn)物的檢測。熒光信號達到設(shè)定的閾值時，經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越少，說明擴增次數(shù)少，獲得的核酸產(chǎn)物含有病毒的概率越大。測某基因的C值是指將某目的基因與過量的熒光素混合后放入PCR反應(yīng)體系中，隨PCR產(chǎn)物的積累，將熒光信號達到設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)稱為Ct值。不同的樣本，數(shù)值不同。請回答下列問題：

步驟		溫度	時間	循環(huán)數(shù)
1	逆轉(zhuǎn)錄	50℃	10min	1cycle
2	預(yù)變性	95℃	5min	1cycle
3	變性	95℃	10s	40cycle
	退火/延伸/檢測熒光	55℃	40s

（1）新型冠狀病毒是一種RNA病毒，因此，在核酸提取后，進行RT-PCR時需要加入的酶是

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

和

耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

。
（2）圖甲為某中學(xué)核酸檢測中7支單管樣品的結(jié)果圖片，圖乙是C值圖解。圖甲中陰性參照組為第

7

7

組。原始病毒核酸載量更高的組為第

1

1

組，原因是：

熒光信號達到設(shè)定的閾值時，經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越少，說明擴增次數(shù)少，核酸產(chǎn)物含有病毒的概率越大，第1組相比其他組Ct值最小

熒光信號達到設(shè)定的閾值時，經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越少，說明擴增次數(shù)少，核酸產(chǎn)物含有病毒的概率越大，第1組相比其他組Ct值最小

。
（3）臨床上，將癥狀及影像學(xué)結(jié)果高度疑似、核酸多次檢測為“陰性”的現(xiàn)象稱為檢測結(jié)果“假陰性”，導(dǎo)致“假陰性”結(jié)果可能是由于

①②③⑤

①②③⑤

（填序號）。
①檢測者處于感染初期
②檢測者感染時間較長
③樣本采集位置不規(guī)范
④樣品稀釋度不足
⑤病毒出現(xiàn)變異