2022年12月7日，疫情防控“新十條”發(fā)布，從此，全員核酸檢測成為了歷史。核酸檢測報告單結果分為檢出和未檢出，即陽性和陰性。RT-PC℉檢測大規(guī)模應用于新冠感染篩查中。其檢測流程包括核酸提取、擴增、數據處理及報告，整個流程需4小時或更長時間，其速度快、操作流程簡單、滿足大規(guī)模的篩查以快速獲得新型冠狀病毒核酸是否為陽性的初步證據。RT-PCR加入Taqman熒光探針可以通過測定熒光強度來檢測產物濃度，原理如下：Taqman熒光探針為一段與目的基因互補的核苷酸單鏈，兩端分別連接一個熒光基團R和一個淬滅基團Q。探針結構完整時，R發(fā)射的熒光被Q吸收；而PCR擴增時結合在模板鏈上的探針被切斷，使R和Q分離，R基團發(fā)射的熒光不被淬滅，這樣通過對熒光信號強弱的監(jiān)測就可實現對產物的檢測。熒光信號達到設定的閾值時，經歷的循環(huán)數越少，說明擴增次數少，獲得的核酸產物含有病毒的概率越大。測某基因的C值是指將某目的基因與過量的熒光素混合后放入PCR反應體系中，隨PCR產物的積累，將熒光信號達到設定閾值時所經歷的循環(huán)次數稱為Ct值。不同的樣本，數值不同。請回答下列問題：
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 | |
| 1 | 逆轉錄 | 50℃ | 10min | 1cycle |
| 2 | 預變性 | 95℃ | 5min | 1cycle |
| 3 | 變性 | 95℃ | 10s | 40cycle |
| 退火/延伸/檢測熒光 | 55℃ | 40s | ||
（1）新型冠狀病毒是一種RNA病毒，因此，在核酸提取后，進行RT-PCR時需要加入的酶是
逆轉錄酶
逆轉錄酶
和 耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）
耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）
。（2）圖甲為某中學核酸檢測中7支單管樣品的結果圖片，圖乙是C值圖解。圖甲中陰性參照組為第
7
7
組。原始病毒核酸載量更高的組為第 1
1
組，原因是：熒光信號達到設定的閾值時，經歷的循環(huán)數越少，說明擴增次數少，核酸產物含有病毒的概率越大，第1組相比其他組Ct值最小
熒光信號達到設定的閾值時，經歷的循環(huán)數越少，說明擴增次數少，核酸產物含有病毒的概率越大，第1組相比其他組Ct值最小
。（3）臨床上，將癥狀及影像學結果高度疑似、核酸多次檢測為“陰性”的現象稱為檢測結果“假陰性”，導致“假陰性”結果可能是由于
①②③⑤
①②③⑤
（填序號）。①檢測者處于感染初期
②檢測者感染時間較長
③樣本采集位置不規(guī)范
④樣品稀釋度不足
⑤病毒出現變異
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；免疫學的應用．
【答案】逆轉錄酶；耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）；7；1；熒光信號達到設定的閾值時，經歷的循環(huán)數越少，說明擴增次數少，核酸產物含有病毒的概率越大，第1組相比其他組Ct值最小；①②③⑤
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/12/11 21:30:2組卷：15引用：3難度：0.5
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1．以下是有關分離與鑒別DNA的技術，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細胞抗原基因（SLA-2基因），構建了該基因的真核表達載體，進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數字表示距復制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質粒導入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質粒C后電泳，請在答題紙相應位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細胞進行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓。實驗結果如圖2，根據實驗結果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41難度：0.6 -
3．下列關于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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