H18雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的凋亡現(xiàn)象制約著生產(chǎn)能力的提高.通過基因工程可改造H18雜交瘤細(xì)胞的抗凋亡能力,相關(guān)步驟如下:
①細(xì)胞培養(yǎng):將人肝癌細(xì)胞在含10%小牛血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng).一段時間后,用胰蛋白酶處理培養(yǎng)液,漂洗后調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為1×107個?mL-1.
②免疫小鼠:向小鼠體內(nèi)注射肝癌細(xì)胞懸液0.8mL,以后每隔2周免疫1次,共3次,最后一次免疫后3天,取脾臟制成細(xì)胞懸液備用.
③細(xì)胞融合及篩選:將脾臟細(xì)胞懸液和骨髓瘤細(xì)胞懸液在50%PEG作用下進(jìn)行融合,篩選出能產(chǎn)生抗人肝癌單克隆抗體HAb18的H18雜交瘤細(xì)胞.
④改造H18雜交瘤細(xì)胞:利用PCR技術(shù)獲得小鼠的bcl-XL基因(抗凋亡基因),構(gòu)建表達(dá)載體,通過脂質(zhì)體法導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞,再篩選出抗凋亡能力明顯提高的H18雜交瘤細(xì)胞.
請分析回答:
(1)步驟①肝癌細(xì)胞合成培養(yǎng)液中特有的成分是血清(血清、血漿)血清(血清、血漿),培養(yǎng)液中還需加入一定量抗生素的目的是防止雜菌污染防止雜菌污染.
(2)步驟②中,肝癌細(xì)胞免疫小鼠需在一定時間內(nèi)間隔注射3次,其目的是刺激小鼠產(chǎn)生更多的淋巴細(xì)胞刺激小鼠產(chǎn)生更多的淋巴細(xì)胞.
(3)步驟③中,除了用50%PEG促進(jìn)細(xì)胞融合外,常用的生物誘導(dǎo)因素是滅活的病毒滅活的病毒,物理誘導(dǎo)方法有電刺激(振蕩或離心)電刺激(振蕩或離心)(寫出一種即可).步驟④中通過脂質(zhì)體法能將表達(dá)載體導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞依賴的原理是膜的流動性膜的流動性.
(4)與普通抗肝癌藥物相比,用抗人肝癌單克隆抗體HAb18與相應(yīng)抗癌藥物結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”治療肝癌的主要優(yōu)點是能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位,減少對正常細(xì)胞的傷害,減少用藥劑量能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位,減少對正常細(xì)胞的傷害,減少用藥劑量.
(5)乙醇有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用.為了建立H18雜交瘤細(xì)胞凋亡檢測模型,科研人員利用不同濃度的乙醇溶液誘導(dǎo)H18雜交瘤細(xì)胞凋亡,其結(jié)果如圖所示.抗凋亡細(xì)胞株的建立與篩選應(yīng)選擇的誘導(dǎo)條件是CC(用圖中字母表示).
【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用.
【答案】血清(血清、血漿);防止雜菌污染;刺激小鼠產(chǎn)生更多的淋巴細(xì)胞;滅活的病毒;電刺激(振蕩或離心);膜的流動性;能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位,減少對正常細(xì)胞的傷害,減少用藥劑量;C
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:13引用:3難度:0.3
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1.為實現(xiàn)對肝癌的有效治療,研究人員通過比較肝腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞間的差異,篩選有效的免疫治療靶點,制備相應(yīng)單克隆抗體并構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物。
(1)檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的CLDN6蛋白能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)生,選定其作為單克隆抗體的作用靶點。CLDN6蛋白是一個跨膜蛋白,包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū),制備免疫小鼠所用的抗原時,應(yīng)提取
(2)將CLDN6蛋白抗原注射到小鼠體內(nèi),從該小鼠脾臟中獲取
(3)將該單克隆抗體與抗癌藥物DMI 結(jié)合構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物(CLDN6-DMI)。用不同濃度的游離DMI、CLDN6-DMI或lgG-DMI(無關(guān)抗體-DMI)分別處理高表達(dá)CLDN6細(xì)胞和低表達(dá)CLDN6細(xì)胞,檢測細(xì)胞活力,結(jié)果如圖1:
由圖可知,CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達(dá)CLDN6細(xì)胞,依據(jù)是
(4)如圖2表示抗體—藥物偶聯(lián)物CLDN6-DMI的作用機(jī)制:由圖分析,CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達(dá)CLDN6細(xì)胞的原因是發(fā)布:2024/12/19 7:0:1組卷:3引用:1難度:0.6 -
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