為加速對乙肝的控制，經(jīng)國務(wù)院批準(zhǔn)，2002年起我國將乙肝疫苗納入兒童計(jì)劃免疫。第一代乙肝疫苗是血源性乙肝疫苗，但該類疫苗產(chǎn)量低，有一定的安全隱患。隨著技術(shù)的進(jìn)步，人們開發(fā)出了第二代乙肝疫苗一基因工程乙肝疫苗。請回答下列問題：
（1）基因工程乙肝疫苗是通過構(gòu)建含有乙肝表面抗原的重組質(zhì)粒后再轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞，從而制備出乙肝病毒表面的有效蛋白。其中的目的基因是

乙肝病毒表面的有效蛋白基因

乙肝病毒表面的有效蛋白基因

，該目的基因的序列已經(jīng)測定出來，且乙肝病毒表面的有效蛋白分子較小，所以可利用已知的基因序列通過

人工合成的方法

人工合成的方法

獲取目的基因。
（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)常用的兩種工具酶是

限制酶、DNA連接酶

限制酶、DNA連接酶

，操作過程中形成3種連接體，導(dǎo)致這種結(jié)果的原因很可能是

目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化導(dǎo)致

目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化導(dǎo)致

。
（3）將表達(dá)載體導(dǎo)入酵母菌時(shí)，與大腸桿菌相似，要用

氯化鈣

氯化鈣

處理，使受體細(xì)胞成為

感受態(tài)

感受態(tài)

細(xì)胞。
（4）篩選和鑒定經(jīng)轉(zhuǎn)化處理的酵母菌細(xì)胞時(shí)，要確定是否生產(chǎn)出乙肝疫苗，需要通過

抗原-抗體雜交方法

抗原-抗體雜交方法

（方法）進(jìn)行檢測。