44.Cre酶是一種重組酶,LoxP是能被Cre酶識別的特異DNA序列,當(dāng)一條DNA鏈上存在兩個相同的LoxP序列且方向相同時,Cre酶能有效切除兩個位點間的DNA序列(如圖1)。因此Cre/LoxP重組酶系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)特異位點的基因敲除、基因插入等操作。
(1)啟動子的功能是
;Cre酶與限制酶的功能類似,能將特定部位的兩個核苷酸之間的
斷開。
(2)據(jù)上圖分析,若細(xì)胞中不含有Cre酶,轉(zhuǎn)錄終止信號序列就會抑制下游GFP基因起作用,細(xì)胞無法發(fā)出熒光;若細(xì)胞中含有Cre酶,Cre酶會切除
,GFP基因就會
,合成綠色熒光蛋白。
(3)當(dāng)細(xì)胞中存在多對Cre酶識別位點和熒光基因時,只有在啟動子之后且與啟動子相鄰的熒光蛋白基因才會表達(dá),借助大腦成像技術(shù),通過熒光蛋白“點亮”大腦內(nèi)的神經(jīng)元,試驗小鼠不同的腦組織細(xì)胞就會呈現(xiàn)不同的顏色,出現(xiàn)“腦彩虹”。
①若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增LoxP基因,需要的引物有
(從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選擇)。PCR反應(yīng)完成后,常采用
來鑒定PCR的產(chǎn)物。
②研究者利用限制酶和
酶構(gòu)建了含有熒光蛋白基因和Cre酶識別序列的基因表達(dá)載體(圖3),并將其導(dǎo)入小鼠細(xì)胞中,培育出了轉(zhuǎn)基因小鼠。若該小鼠腦細(xì)胞中存在Cre酶且僅識別LoxP2時,腦細(xì)胞的色彩為
。