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Cre酶是一種重組酶,LoxP是能被Cre酶識別的特異DNA序列,當(dāng)一條DNA鏈上存在兩個相同的LoxP序列且方向相同時,Cre酶能有效切除兩個位點間的DNA序列(如圖1)。因此Cre/LoxP重組酶系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)特異位點的基因敲除、基因插入等操作。菁優(yōu)網(wǎng)
(1)啟動子的功能是
驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
;Cre酶與限制酶的功能類似,能將特定部位的兩個核苷酸之間的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
斷開。
(2)據(jù)上圖分析,若細胞中不含有Cre酶,轉(zhuǎn)錄終止信號序列就會抑制下游GFP基因起作用,細胞無法發(fā)出熒光;若細胞中含有Cre酶,Cre酶會切除
轉(zhuǎn)錄終止信號序列和LoxP
轉(zhuǎn)錄終止信號序列和LoxP
,GFP基因就會
表達
表達
,合成綠色熒光蛋白。
(3)當(dāng)細胞中存在多對Cre酶識別位點和熒光基因時,只有在啟動子之后且與啟動子相鄰的熒光蛋白基因才會表達,借助大腦成像技術(shù),通過熒光蛋白“點亮”大腦內(nèi)的神經(jīng)元,試驗小鼠不同的腦組織細胞就會呈現(xiàn)不同的顏色,出現(xiàn)“腦彩虹”。
①若利用PCR技術(shù)擴增LoxP基因,需要的引物有
B、C
B、C
(從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選擇)。PCR反應(yīng)完成后,常采用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
來鑒定PCR的產(chǎn)物。
②研究者利用限制酶和
DNA連接酶
DNA連接酶
酶構(gòu)建了含有熒光蛋白基因和Cre酶識別序列的基因表達載體(圖3),并將其導(dǎo)入小鼠細胞中,培育出了轉(zhuǎn)基因小鼠。若該小鼠腦細胞中存在Cre酶且僅識別LoxP2時,腦細胞的色彩為
黃色和藍色
黃色和藍色
。
【答案】驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA;磷酸二酯鍵;轉(zhuǎn)錄終止信號序列和LoxP;表達;B、C;瓊脂糖凝膠電泳;DNA連接酶;黃色和藍色
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/7/7 8:0:9組卷:14引用:2難度:0.6
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    發(fā)布:2024/8/19 15:0:1組卷:5引用:1難度:0.7
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    (1)疫苗載體構(gòu)建及工程菌的制備
    部分腸道細菌能夠分泌外膜囊泡(OMV),OMV能穿越腸道上皮屏障,活化腸黏膜內(nèi)豐富的免疫細胞。研究人員利用如圖1所示元件構(gòu)建表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌來制備工程菌:
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    (注:ClyA:OMV表面特異蛋白的基因;Ag:腫瘤細胞表面特異性抗原基因;mFc:小鼠Fc基因)
    ①選擇大腸桿菌來制備工程菌的原因有
     
    (答出兩點即可)。
    ②圖1中,ClyA基因的作用是
     
    ;mFc基因的表達產(chǎn)物能夠與樹突狀細胞(DCs)表面的特異性受體結(jié)合,從而提高DCs
     
    OMV的能力。
    (2)免疫效果調(diào)節(jié)及評估
    為避免長期抗原刺激引起的免疫耐受,研究人員引入阿拉伯糖誘導(dǎo)型啟動子來控制ClyA-Ag-mFc融合蛋白基因的表達,即只有在阿拉伯糖存在的情況下,才會誘導(dǎo)表達融合蛋白。為進一步證實按上述流程操作制備的工程菌在人為可控條件下引發(fā)特異性免疫反應(yīng)的效果,研究人員用健康的小鼠進行如下實驗:
    組別 載體構(gòu)建具體操作 第0、4、8天口服阿拉伯糖 結(jié)果檢測
    A組 空載體 + 第12天,每組隨機取5只小鼠的等量的脾臟細胞與肺轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細胞共培養(yǎng),檢測黑色素瘤細胞存活率,結(jié)果如圖2。
    B組 ClyA-mFc +
    c組 ClyA-OVA +
    D組 ClyA-OVA-mFc (a)
    E組 (b) (c)
    (注:“+”代表口服、“-”代表不口服;OVA:肺轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細胞表面特異性抗原基因)
    ①D、E組的操作和口服情況分別是a:
     
    ;b:
     
    ;c
     
    。圖2結(jié)果說明工程菌在人為可控條件下引發(fā)了特異性免疫反應(yīng),理由是
     
    。
    ②研究人員在上述實驗基礎(chǔ)上,增加了實驗小組口服阿拉伯糖的頻率和天數(shù),其目的是研究
     

    (3)該工程菌的開發(fā)為不同腫瘤的精準治療提供了可能。參考本實驗,利用圖3設(shè)計針對治療皮下結(jié)腸腫瘤的工程菌表達載體元件
     
    發(fā)布:2024/8/23 4:0:1組卷:14引用:3難度:0.6
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    (1)天花疫苗接種對預(yù)防猴痘有效性達85%的直接原因是
     

    (2)圖甲為mRNA疫苗VGPox 1-3模式圖,接種疫苗后,RNA外面包裹脂質(zhì)外膜的作用是
     
    。菁優(yōu)網(wǎng)
    (3)圖乙所示為利用基因工程生產(chǎn)mRNA疫苗VGPox 1-3的過程,其中①、②所需酶分別是 
     
     
    。③過程一般需要用
     
    處理大腸桿菌使細胞處于
     
    的生理狀態(tài),以完成轉(zhuǎn)化過程。
    (4)研究人員給招募的志愿者接種該疫苗后,通常使用
     
    技術(shù)檢測志愿者體內(nèi)是否產(chǎn)生相應(yīng)抗體。
    發(fā)布:2024/8/29 15:0:9組卷:7引用:2難度:0.6
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