35.回答下列有關(guān)遺傳信息傳遞與表達(dá)的問題。
野生型大腸桿菌(E.coli)具有完整的LacZ基因,該基因編碼的β-半乳糖苷酶由α片段和ω片段兩部分組成,兩部分均存在時可將無色化合物X-gal“切割”成半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì)5-溴-4-靛藍(lán),從而使整個菌落變?yōu)樗{(lán)色。DH5α是基因工程中常用的一種大腸桿菌誘變菌株,對氨芐青霉素敏感,其LacZ基因中編碼ω片段的序列仍然保留,但編碼α片段的序列缺失。
(1)LacZ基因控制β-半乳糖苷酶合成的過程主要包括
和
兩個環(huán)節(jié)。
(2)某研究小組構(gòu)建了質(zhì)粒pXY-1,如圖甲所示,該質(zhì)粒含氨芐青霉素抗性基因Amp
r和編碼大腸桿菌β-半乳糖苷酶α片段的基因片段LacZ。圖乙顯示的則是NasⅠ、HpaⅡ和KasⅠ三種限制酶的識別序列(↓表示切割位點(diǎn))。若以該質(zhì)粒作為運(yùn)載體,將外源目的基因(圖丙)導(dǎo)入大腸桿菌DH5α菌株,在構(gòu)建重組質(zhì)粒時應(yīng)選用的限制酶是
。此外,還需用到的另一種酶是
。
(3)(不定項(xiàng))若用含有氨芐青霉素和X-gal的固體培養(yǎng)基篩選導(dǎo)入了pXY-1質(zhì)粒的DH5α大腸桿菌,下列說法正確的是
。
A.沒有導(dǎo)入任何質(zhì)粒的DH5α大腸桿菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為白色
B.導(dǎo)入了pXY-1空載體質(zhì)粒的DH5α大腸桿菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為藍(lán)色
C.導(dǎo)入了pXY-1重組質(zhì)粒的DH5α大腸桿菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為白色
D.導(dǎo)入了pXY-1重組質(zhì)粒的DH5α大腸桿菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為藍(lán)色
(4)現(xiàn)從(3)中的固體培養(yǎng)基平板上挑取一個重組菌落,經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后提取質(zhì)粒,分別用不同的限制酶處理并對酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,結(jié)果如表所示:
所用限制性內(nèi)切酶 |
所得條帶長度 |
BamHⅠ、ScaⅠ雙酶切 |
1230bp、2770bp |
HpaⅡ、ScaⅠ雙酶切 |
460bp、1240bp、xbp |
據(jù)此可知,目的基因全長為
bp,在其內(nèi)部存在
(填限制酶名稱)的切割位點(diǎn),表中字母x代表的數(shù)值應(yīng)為
。