25.甘蔗線條花葉病毒(SCSMV)是引發(fā)甘蔗花葉病的主要病原之一,在世界各大甘蔗區(qū)普遍發(fā)生,嚴(yán)重威脅甘蔗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,如何建立快速有效的檢測方法對于該病毒的防控有著極為重要的意義。研究人員通過病株汁液提純得到病毒并以此制備抗體,由于不能完全排除寄主蛋白的影響,制備的抗體在檢測時易出現(xiàn)假陽性;改進(jìn)科研方案后,研究人員利用基因工程和細(xì)胞工程技術(shù)制備出甘蔗線條花葉病毒(SCSMV)的P
1蛋白的單克隆抗體,相關(guān)流程如圖1所示,圖2為pET28a質(zhì)粒及P
1基因結(jié)構(gòu)示意圖。請回答下列問題。
?
(1)甘蔗線條花葉病毒是一種RNA病毒,可采取RT-PCR法獲得大量P
1基因,該過程中需要用到的酶有
。
(2)圖1中,過程①需根據(jù)
設(shè)計特異性引物,還需在引物的5′端添加限制酶
的識別序列,確保P
1基因正確插入啟動子與終止子之間,其目的是
。已知P
1基因右端X處的堿基序列為5′-GAATAAAATACTAAAATCTTC-3′,則其中一個引物序列為5′-
-3′(從5′端到3′端)。
(3)pET28a-P1CS載體可導(dǎo)入經(jīng)
處理的大腸桿菌以提高轉(zhuǎn)化效率。該載體上存在調(diào)節(jié)基因,在大腸桿菌中可指導(dǎo)合成阻遏蛋白,阻遏蛋白與操縱基因結(jié)合,阻止
與啟動子結(jié)合,抑制P
1基因的轉(zhuǎn)錄,其原理如圖3所示。分析圖3可知,需將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含
的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng),并從培養(yǎng)液中分離提純P
1蛋白。
(4)圖1中的過程⑤目的是
,隨后可利用
誘導(dǎo)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,再進(jìn)行篩選。獲得雜交瘤細(xì)胞后,在注入家兔腹腔前還應(yīng)進(jìn)行
。