21.孔雀石綠(簡稱MG)是廣泛使用的有機(jī)染料,在自然環(huán)境中極難降解,容易引起土壤污染,進(jìn)而危害人體健康。因此從土壤中分離和篩選出高效的MG降解菌有非常重要的意義。已知MG在水中溶解度低,含過量MG的固體培養(yǎng)基不透明。
(1)培養(yǎng)基的配制:MG降解菌富集培養(yǎng)基需含有NaH
2PO
4、KH
2PO
4、NaCl、NH
4Cl、CaCl
2、MgSO
4、水等,再加
作為唯一碳源。培養(yǎng)基配制好后,需用
法進(jìn)行無菌處理才能后續(xù)使用。
(2)MG高效降解菌株的富集:如圖所示,將1.0g土樣接入含上述配制好的培養(yǎng)液的三角瓶中,將三角瓶置于30℃、180r/min搖床中振蕩培養(yǎng)1~2天,此操作的目的是
,直至培養(yǎng)液變渾濁后,換瓶重復(fù)操作2-3次,以達(dá)到富集的目的。
(3)MG高效降解菌株的分離和純化:圖中所示的分離純化細(xì)菌的方法是
。實驗中初步估測A中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為1.5×10
9個/mL,若要在圖中每個平板上涂布0.1mL稀釋后的菌液,且每個平板上長出的菌落數(shù)約為150個,則應(yīng)將A中的菌液稀釋
倍。
(4)MG高效降解菌株的鑒定:將純化獲得的菌種接種于含過量MG的固體培養(yǎng)基(其他營養(yǎng)成分等適宜)上,根據(jù)培養(yǎng)基是否出現(xiàn)
,就可以鑒別出目的菌株,原因是
。
(5)MG高效降解菌株的保存:獲得純凈的菌種后,需要進(jìn)行菌種的保藏。若需長期保存,可以采用
的方法。