奶酪是一種常見的食品,傳統(tǒng)的方法是從未斷奶的小牛的胃黏膜里提取牛凝乳酶,它能水解多肽鏈中苯丙氨酸和甲硫氨酸之間的肽鍵以促使牛奶凝結(jié)來生產(chǎn)奶酪,此方法產(chǎn)量低且昂貴。如今科學家將編碼牛凝乳酶的基因?qū)氪竽c桿菌中,實現(xiàn)牛凝乳酶的批量生產(chǎn),極大的滿足了奶酪生產(chǎn)的需求。請回答相關問題:
(1)科學家利用基因工程生產(chǎn)出大量的牛凝乳酶,該工程是在
(DNA)分子
(DNA)分子
水平上進行設計和施工的,其核心步驟是
基因表達載體的構建
基因表達載體的構建
。
(2)使大腸桿菌產(chǎn)生牛凝乳酶的目的基因最好從
cDNA文庫
cDNA文庫
(cDNA文庫/基因組文庫)中獲取,原因是
大腸桿菌是原核生物,cDNA文庫中沒有內(nèi)含子,基因結(jié)構與原核細胞的基因結(jié)構更接近
大腸桿菌是原核生物,cDNA文庫中沒有內(nèi)含子,基因結(jié)構與原核細胞的基因結(jié)構更接近
。
(3)利用圖示目的基因和質(zhì)粒構建重組質(zhì)粒,最好選用
NcoI和XhoI
NcoI和XhoI
(填限制性核酸內(nèi)切酶名稱)切割,理由是
目的基因不會被破壞、防止目的基因或載體自身的黏性末端連接、防止目的基因與載體反向連接
目的基因不會被破壞、防止目的基因或載體自身的黏性末端連接、防止目的基因與載體反向連接
。若要初步篩選出導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌,要在含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
(氨芐青霉素/四環(huán)素)的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
(4)最后進行凝乳酶活性檢測:將適量的大腸桿菌表達出的凝乳酶的提取物加入脫脂奶粉溶液中,37℃保溫一段時間,可觀察到
脫脂奶粉溶液有明顯的凝結(jié)
脫脂奶粉溶液有明顯的凝結(jié)
現(xiàn)象。