29.內(nèi)皮素(ET)是一種多肽,主要通過與靶細(xì)胞膜上的ET受體(ET
A)結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng).科研人員通過構(gòu)建表達(dá)載體,實現(xiàn)ET
A基因在大腸桿菌細(xì)胞中的高效表達(dá),其過程如下圖所示,圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的識別序列為
,限制酶XhoⅠ的識別序列為
.請據(jù)圖分析回答:
(1)進(jìn)行過程①時,需要加入緩沖液、引物、dNTP和
酶等.完成過程①②③的目的是
.
(2)過程③和⑤中,限制酶XhoⅠ切割DNA,使
鍵斷開,形成的黏性末端是
.
(3)構(gòu)建的重組表達(dá)載體,目的基因上游的啟動子是
的部位,進(jìn)而可驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄.除圖中已標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外,基因表達(dá)載體還應(yīng)具有的結(jié)構(gòu)是
.
(4)過程⑥要用CaCl
2預(yù)先處理大腸桿菌,使其成為容易吸收外界DNA的
細(xì)胞.
(5)將SNAP基因與ET
A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因,其目的是有利于檢測
.